目的:因患有非小细胞肺癌而死亡约占因肺癌死亡总人数的85%-90%,在治疗过程中极易产生耐药性或者对化疗药物相对不敏感。通过探索新型化合物的抗癌能力或评估常规用于其他临床疾病的药物,人们已经尝试开发了新型化疗药物。对一些疾病有效并且活性成分已知的中药,因其临床副作用小,被认为是新型强效抗癌药物的天然来源。柯诺辛碱（Corynoxine,CXN）提取自传统中药大叶钩藤根和茎,是钩藤生物碱的成分之一。钩藤生物碱具有抗高血压、神经保护、血管舒张、抗心律不齐、抗癫痫以及抗肿瘤活性,作为单体成分的柯诺辛碱在肿瘤方面的作用未见报道。本文通过体外实验研究柯诺辛碱对人非小细胞肺癌细胞株A549及H1975的增殖、周期、凋亡及自噬方面的影响,初步探讨其可能的抗肿瘤机制,以期为非小细胞肺癌的治疗提供新的临床潜在候选药物。方法:1.采用MTT法检测柯诺辛碱对A549和H1975细胞株的增殖抑制作用。2.乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测柯诺辛碱对A549和H1975产生的细胞毒性情况。3.克隆形成实验检测柯诺辛碱对A549和H1975细胞活力的影响。4.采用Hoechst荧光染色法,荧光显微镜观察A549和H1975细胞凋亡后的形态改变,并使用普通光学显微镜观察药物处理后细胞形态的改变。5.流式细胞术检测不同浓度柯诺辛碱对A549和H1975细胞凋亡率的影响。6.使用PI单染法染色后,使用流式细胞术检测不同浓度柯诺辛碱对A549和H1975细胞周期分布情况的影响。7.使用GFP-LC3质粒转染A549和H1975细胞,200（?）M的柯诺辛碱处理后,联合使用DAPI染液,在荧光显微镜下观察细胞发生自噬情况。8.采用200（?）M浓度的柯诺辛碱和3-MA共处理细胞24 h,蛋白免疫印迹法和Annexin V-FITC/PI双染法检测检测该浓度下自噬是否有利于非小细胞肺癌A549细胞的凋亡。9.WB检测柯诺辛碱对A549细胞密切相关的PI3K/Akt/m TOR通路蛋白表达水平的影响。并进一步验证不同浓度的柯诺辛碱对细胞凋亡、周期和自噬相关蛋白Bax、Bcl2、Cdc25C、CDK1、Cyclin B1、LC3B、p62和ATG5表达水平或者磷酸化水平的影响。结果:1.柯诺辛碱显著抑制非小细胞肺癌A549和H1975的细胞增殖、细胞活力,并产生了细胞毒性。2.柯诺辛碱以浓度梯度依赖性的诱导A549和H1975的G2/M期的细胞周期阻滞,是由于p-Cdc25C、p-CDK1的上调,Cyclin B1表达水平的下调。3.柯诺辛碱诱导非小细胞肺癌A549和H1975的凋亡具有浓度梯度依赖性,在A549细胞中表现出Bax蛋白表达上调,Bcl-2的下调。4.柯诺辛碱在200（?）M浓度下诱导A549和H1975细胞发生自噬,初步验证了该浓度诱导的自噬促进了凋亡的产生。5.柯诺辛碱在A549细胞中下调了PI3K/Akt/m TOR信号通路,可能产生了多种生物学效应。结论:通过一系列实验评估,验证了柯诺辛碱对非小细胞肺癌细胞A549和H1975细胞具有显著的抗肿瘤作用,其机制可能是:1、通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路,进而抑制细胞增殖;2、通过Cdc25c/CDK1/Cyclin B1通路诱导G2/M期周期阻滞;3、通过下调Bcl-2和上调Bax蛋白诱导凋亡,4、诱导产生了自噬,并进一步促进细胞凋亡的发生。