【摘 要】
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目的:通过临床收集AIH患者及对照组的末端回肠组织并行肠道血管屏障相关指标检测评估AIH患者有无肠道血管屏障受损,建立实验性自身免疫性肝炎(EAH)小鼠模型,验证EAH小鼠中是否存在肠道血管屏障受损,并给予小鼠抗生素和双歧杆菌B420处理,观察其能否延缓AIH的病情进展,为AIH的治疗寻找新的方向。方法:1、收集2019年1月-2020年1月在天津医科大学总医院消化科住院部就诊的22例AIH患者和
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目的:通过临床收集AIH患者及对照组的末端回肠组织并行肠道血管屏障相关指标检测评估AIH患者有无肠道血管屏障受损,建立实验性自身免疫性肝炎(EAH)小鼠模型,验证EAH小鼠中是否存在肠道血管屏障受损,并给予小鼠抗生素和双歧杆菌B420处理,观察其能否延缓AIH的病情进展,为AIH的治疗寻找新的方向。方法:1、收集2019年1月-2020年1月在天津医科大学总医院消化科住院部就诊的22例AIH患者和6例健康人的血清ALT、AST、Ig G等生化指标检测值及性别、年龄等基线数据行统计分析,收集其末端回肠组织,HE染色观察肠道炎症情况,PCR、Western blot方法检测肠道血管屏障相关指标(PV-1),分析肠道血管屏障与肠道组织HE染色结果;2、取雌性C57BL/6小鼠42只,取18只小鼠用于提取制备肝抗原S-100,剩余小鼠随机分为四组,空白对照组(n=6)、S-100模型组(n=6)、S-100+双歧杆菌B420组(n=6)和S-100+广谱抗生素组(n=6)。对照组不做特殊处理,实验组通过两次腹腔注射肝抗原乳化液诱导实验性自身免疫性肝炎(EAH)小鼠模型,抗生素组提前抗生素消融两周,双歧杆菌组和抗生素组分别给予双歧杆菌溶液灌胃及含广谱抗生素溶液的动物饮用水,4周后脊椎脱臼法处死各组小鼠,并分别收集血液、末端回肠和肝脏组织;3、自实验开始后每周称量各组小鼠的体重并记录;收集的血液离心后检测血清ALT、AST数值;HE染色检测肝组织炎症;4、RT-PCR、Western blot及免疫荧光检测各组小鼠肠道组织中PV-1表达水平,明确各组肠道血管屏障是否受损;肝脏和肠道HE法染色后判读各组组织学结果及评估肝脏、肠道炎症受损程度。结果:1、AIH患者组与对照组相比肝酶指标升高(P<0.05),末端回肠绒毛(259.92±88.39μm vs 344.06±46.08μm,P<0.001)长度明显变短;隐窝深度(104.93±21.39μm vs145.17±28.27μm,P<0.05)降低;AIH患者组回肠组织中PV-1 m RNA相对表达量较对照组明显上调(P<0.001),PV-1蛋白表达量也较对照组增加(P<0.01)。2、与空白对照组相比,EAH造模组小鼠体重增加缓慢(P<0.05),微生态干预组(双歧杆菌B420组和广谱抗生素组)较模型组体重有所增长(P<0.05)。3、肝抗原S-100诱导肝损伤后模型组较对照组血清ALT及AST水平显著增高(P<0.05),肝脏HE染色示肝细胞坏死、炎症细胞浸润明显增加;予双歧杆菌B420及广谱抗生素处理后血清ALT及AST水平显著降低(P<0.05)并且明显改善炎细胞浸润。4、RT-PCR、Western blot及免疫荧光分别检测各组小鼠末端回肠组织PV-1的表达量,与正常对照组相比,S-100造模组PV-1表达明显上调(P<0.05),双歧杆菌B420组与广谱抗生素组PV-1表达水平较模型组明显下降(P<0.05)。结论:1、AIH患者存在肠道血管受损,其末端回肠绒毛长度较健康人明显变短,隐窝深度也降低2、EAH小鼠造模成功且造模组小鼠存在肠道血管屏障受损。3、肠道微生态干预可使EAH小鼠肠道血管屏障受损减轻,并使EAH小鼠的肝功能受损程度下降,肝组织炎症浸润减少,回肠绒毛长度及隐窝深度增加,提示临床中可通过肠道微生态干预为AIH提供新的治疗方向。
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