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人参为五加科植物人参(Panax ginseng)的干燥根,是传统的滋补中药,人参具有大补元气,复脉固脱,补脾益肺,生津安神之功效。它含有多种化学成分:皂苷、多糖、聚炔醇、挥发油、多肽等。红参是其炮制品的一种,是鲜人参经过蒸制、干燥制得而成。
本文利用大孔吸附树脂、硅胶层析、高效液相色谱法(HPLC)等分离分析手段,对酸水解红参总皂苷及单体皂苷的含量变化、红参与五味子配伍前后皂苷的含量变化、人参皂苷F2的制备方法及其对肿瘤细胞的抑制作用进行研究。
1.采用正交设计方法对酸水解红参制备总皂苷工艺进行研究,酸水解红参的最佳工艺:A1,B2,C3,即用盐酸对红参进行水解(120℃,pH值为5的条件),总皂苷的含量最高为4.512%,为确定酸水解红参最佳工艺提供了实验依据。
2.利用高效液相色谱法对酸水解样品及配伍样品中人参皂苷Re、Rb1、Rb2、Rh1、Rh2、Rg2、Rg3、F2八种单体皂苷进行含量测定,揭示在不同条件下八种单体的含量变化情况。对酸水解红参和红参五味子配伍样品中人参皂苷F2的含量进行比较,结果显示盐酸水解红参中人参皂苷F2的含量较高,可以较好地实现人参皂苷F2的制备。
3.选用大孔吸附树脂、硅胶柱层析以及薄层分离等方法,对盐酸水解红参样品(120℃,pH值为3的条件)进行分离制备人参皂苷F2,利用高效液相色谱及电喷雾质谱技术对人参皂苷进行分析鉴定:确定为人参皂苷F2,纯度为98%,并得到了皂苷F2的裂解规律。
4.采用噻唑蓝(MTT)的方法,检测人参皂苷F2,粗品皂苷X2(以下简称粗品X2)以及70%乙醇提取物在10~400μg/ml浓度下对肿瘤细胞的抑制情况:
(1)人参皂苷F2对胃癌SGC-7901细胞具有一定的杀伤作用,人参皂苷F2的浓度为40μg/ml时,肿瘤细胞的抑制率为13.95±0.912%(P<0.01);人参皂苷F2作用肺癌SPC-A-1细胞的浓度为400μg/ml是抑制肺癌SPC-A-1细胞的较优浓度,抑制率为10.15±1.04%。
(2)粗品X2对胃癌SGC-7901细胞具有一定的抑制作用:当10~400μg/ml粗品X2作用胃癌SGC-7901细胞时,发现随着浓度的增加肿瘤细胞的抑制率先增加后降低,浓度为50μg/ml是粗品X2抑制胃癌SGC-7901细胞的最优浓度,抑制率为21.89±4.53%,(P<0.01)。
粗品X2对肺癌SPC-A-1细胞也呈现上述相似的现象:药品浓度为100μg/ml时,抑制率最高为15.02±2.90%。
(3)70%提取物浓度为40μg/ml是抑制胃癌SGC-7901细胞的较优浓度,抑制率为15.48±2.79%;200μg/ml为抑制肺癌SPC-A-1细胞的最优浓度,抑制率是63.48±1.71%(P<0.01)。