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上皮间质转化(EMT)是指上皮细胞失去其原有特性并获得间充质细胞表型特征的生物学现象,EMT不仅参与胚胎发育,而且在肿瘤侵袭转移,组织平衡,创伤修复和器官纤维化等病理过程中扮演着重要角色。EMT过程最显著的特征就是细胞从整齐紧密排列的上皮细胞结构变成了纺锤状的间充质细胞形态,细胞迁移能力增加,同时伴随着细胞粘附连接蛋白E-cadherin的表达量下降。微小核糖核酸(microRNA, miRNA)是一类长度约为20-22个核苷酸的非编码单链小核糖核酸分子,它们在多细胞生物中结构与功能高度保守,通过与mRNA3’UTR的互补结合参与转录后水平的基因表达调控。最近有文献报道,miR-200家族成员通过靶向E-cadherin的转录抑制因子ZEB1和ZEB2,参与了肿瘤细胞EMT过程的调控。肝细胞EMT现象在肝癌发生、转移和肝纤维化等病理过程中均发挥重要作用。在体内外,TGF-β均是诱导肝细胞EMT的关键因素,而Snail1和ZEB1则是TGF-β诱导肝细胞EMT过程中,调控E-cadherin表达最为重要的转录抑制因子。本论文中,我们首先发现在TGF-β诱导小鼠肝细胞AML-12发生EMT的过程中,miR-30和miR-101的表达水平显著降低,Snail1与ZEB1的表达量则同时升高。通过靶点预测,我们进一步发现Snail1mRNA的3’UTR中有miR-30的靶点,而ZEB1mRNA的3’UTR中则有miR-101的靶点序列。荧光素酶报告基因活性测定、定量PCR和Western-blot等实验结果证明miR-30和miR-101分别通过与Snaill和ZEB1mRNA3’UTR中的靶点序列结合,抑制Snail1与ZEB1的表达。更重要的是,在TGF-β诱导AML-12肝细胞EMT发生的过程中,转染miR-101或miR-30能够下调Snail1或ZEB1的表达,从而增加E-cadherin的表达,并有效地抑制EMT现象的发生。最后,细胞划痕实验和迁移实验的结果均显示,转染miR-101或miR-30能显著抑制TGF-β诱导的肝细胞迁移。我们的研究结果初步揭示了miR-101与miR-30通过抑制Snaill和ZEB1的表达,参与调控肝细胞EMT过程的作用机制,为深入了解miR-101与miR-30在肝纤维化/硬化和肝癌发生/转移过程中的作用奠定了基础。