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研究目的 模拟中度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者的低氧状态,观察间断低氧(IH)对大鼠神经细胞凋亡的影响,探讨OSAHS患者出现认知功能障碍的病理生理机制;观察IH状态下大鼠脑内诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,探讨二者在神经细胞凋亡中的作用,并结合HIF-1转录活性的测定,研究以HIF-1为核心的神经系统缺氧应答反应的分子机制;通过对比不同方式低氧状态下HIF-1α的表达情况,对间断低氧这种OSAHS所特有的低氧方式在睡眠呼吸暂停中所起的作用进行初步的评价。 材料与方法 1 材料 成熟雄性Wistar大鼠24只,体重300-350克,混合气体(10%氧气),气体交换控制系统;氧浓度监测仪;iNOS和HIF-1α的抗体,蛋白提取试剂盒;Trizol溶液;紫外可见分光光度计;PCR循环仪;一步法PCR试剂盒;γ-P32标记的dATP等。 2 实验步骤 成熟雄性Wistar大鼠24只,体重300-350克,由中国医科大学实验动物中心提供。随机数字法分为3组:慢性低氧组(n=8),在预留有进出气孔的封闭箱体内,持续吹人10%O2的气体;间断低氧组(n=8),在预留有进出气孔的封闭箱体内,由进气孔交替(90s交替)吹入氮气和空气,出气孔接气体检测仪,分析箱内O2和CO2的浓度,通过调节氮气的流量,使箱内气体在10%O2和空气之间交替循环;常氧对照组(n=8),在预留有进出气孔