苦参碱对异丙肾上腺素致左心室肥厚大鼠心肌组织细胞因子的影响

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目的研究苦参碱(matrine,MAT)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)致大鼠病理性左室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)心肌组织中炎症相关因子的影响,探讨苦参碱抗LVH与细胞因子间的关系。方法采用皮下注射ISO法复制大鼠慢性病理性左室肥厚模型。将72只雄性SD大鼠随机分为6组,设(1)正常对照组(生理盐水),(2)模型组(ISO,5mg·kg-1),(3)苦参碱对照组(MAT,200mg·kg-1),(4)低、中、高剂量苦参碱干预组(MAT,50、100、200 mg·kg-1),每组12只。连续给药7d后,乌拉坦麻醉大鼠,有创心功能测定技术观察血流动力学变化。心肌组织经4%多聚甲醛固定后进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,比较病理形态学差异;采用酶联免疫法(euzymelinked immunosorbent assay,ELISA)测定血清中胰岛素增长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)和转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的浓度,实时荧光定量RT-PCR测定心肌组织中IGF-1和TGF-β1的mRNA表达;采用Ray Bio?Rat Cytokine Array 3 Kit抗体蛋白芯片技术对心肌组织中27种炎症相关因子进行筛查,选取信号Fold change比值最大为差异因子。蛋白芯片法筛选出具有差异的细胞间粘附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、巨噬细胞炎症蛋白2(macrophge inhibitory protein-2,MIP-2)、C-X-C基趋化因子1(C-X-C motif chemokien-1,CXCL1)和睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)四个炎症相关因子,并用ELISA法对四种细胞因子含量变化进行验证。结果1.与正常对照组比较,模型组大鼠左室重量(left ventricular wieght,LVW)和心率显著升高(P<0.05),左室内压最大变化速率、左室收缩压、左室舒张压均显著下降(P<0.01);心肌纤维结构紊乱、间质可见水肿和炎性细胞浸润并伴有大面积细胞坏死;外周血清中IGF-1和TGF-β1含量显著升高(P<0.05),心肌组织中IGF-1和TGF-β1的mRNA水平表达升高(P<0.01);蛋白芯片法筛查后经ELISA技术验证心肌组织中ICAM-1含量明显升高(P<0.05),MIP-2、CXCL1和CNTF的含量显著下降(P<0.05)。2.与模型组相比,苦参碱干预能使ISO致左室肥厚大鼠的左室重量显著降低;苦参碱中、高剂量干预组能够改善血流动力学参数LV dP/dtmax、LV dP/dtmin、LVSP、LVEDP(P<0.05);低剂量苦参碱干预对血流动力学参数的影响不大。不同剂量的苦参碱均能改善左室肥厚心肌细胞纤维化且对大鼠心率无影响;苦参碱能够使左室肥厚大鼠外周血清IGF-1和TGF-β1的含量和心肌组织中基因水平表达下调;苦参碱能够降低左室肥厚大鼠心肌组织中ICAM-1的水平,升高MIP-2、CXCL1和CNTF的水平。结论小剂量连续多次ISO皮下给药构建左室肥厚动物模型可操作性强、动物存活率高;IGF-1、TGF-β1和ICAM-1三种细胞因子可能介入了左室肥厚过程;苦参碱对ISO致大鼠慢性病理性左室肥厚具有改善作用,其机制可能与苦参碱调控NF-КВ信号通路上游IGF-1、TGF-β1和CNTF以及下游ICAM-1、MIP-2和CXCL1因子有关。
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