叶绿体蛋白的运输是一个严格调控的过程。大多数蛋白由核基因编码，在胞质中合成前体蛋白(新生肽)，前体蛋白与胞质辅助因子形成一种易于运输的具有导向作用的复合物，从而使叶绿体蛋白正确定位到该细胞器的特定部位。因此，深入研究胞质辅助因子与前体蛋白的导肽区识别和相互作用，对于阐明前体蛋白正确靶向定位的分子机理，深入理解真核细胞膜蛋白定位过程中，细胞核—细胞质—叶绿体之间的通讯联系和相互作用具有重要意义。 磷酸丙糖转运器(TriosePhosphateTranslocator，TPT)由位于叶绿体内被膜上的同质二聚体蛋白组成。它能催化光合原初同化物TP输出和Pi运入叶绿体的反向交换运输。它是内膜上运输效率最高的转运器之一，是沟通光合碳代谢与胞质其它代谢的桥梁。因此，TPT担负着内膜的主要运输功能，是光合同化物源库分配的重要调控位点。但是至今有关TPT组分的新生肽(preTPT)和胞质辅助因子相互作用的研究尚无报导。 本文以模式植物拟南芥基因组cDNA为模板，分别克隆了拟南芥胞质中的Hsc70-1CDS和preTPTtp的全长序列。在此基础上研究拟南芥胞质Hsc70与preTPTtp的相互作用。拟南芥preTPTcDNA编码410个氨基酸的前体蛋白，通过生物信息学方法的分析，预测其导肽含有83个氨基酸。对TPT进行疏水性分析，预测结果显示TPT含有8个跨膜结构域。分别构建了pGEX-Hsc70和pGEX-tp原核表达载体，经IPTG诱导表达，得到GST-Hsc70和GST-tp融合蛋白，并经GST-Sepharosebeads亲和纯化。以其为抗原制备了抗体，效价分别为1：104和1：105。凝血酶酶切结合在GST-Sepharosebeads上的GST-Hsc70，离心，获得游离的Hsc70，与结合在GST-Sepharosebeads上的GST-tp体外孵育，通过GSTpull-down方法，用Hsc70的抗体，westernblotting检测到大小为70kD的目的条带。结果表明：AtHsc70-1和tp在体外可以识别结合和相互作用。 选用适于膜蛋白的酵母双杂交系统Dualmembrane，在真核细胞内研究拟南芥胞质Hsc70与TPT组分的新生肽导肽(preTPTtp)的相互作用。分别构建了pTFB1-tp和pDL2-N-Hsc70表达载体，共转化酵母菌株DSY-1，利用His和LacZ报告基因检测。即通过SD/-Trp-Leu-His缺陷型培养基筛选阳性斑，并进行β-半乳糖苷酶定性检测。结果表明：共转化pTFB1-tp和pDL2-N-Hsc70载体的酵母细胞能够在SD/-Trp-Leu-His缺陷型培养基上生长，且5分钟内出现明显的蓝色反应，而阴性对照均无上述现象。进一步证明了在真核生物体内Hsc70与preTPTtp也可发生结合和相互作用。