鹅细小病毒病是由鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)引起的一种急性或亚急性的败血性传染病,主要侵害4~20日龄的雏鹅,以肠道形成栓塞为主要特征。鹅呼肠孤病毒病(goose reovirus,GRV)又称为“鹅出血性坏死性肝炎”,主要侵害2~3周龄雏鹅,被感染雏鹅主要的病理变化是肝脾坏死、胰腺出血、肾脏坏死等。这两种病毒通常混合感染,发病急,死亡率较高。本研究对GPV及GRV毒株进行分离鉴定,研制了鹅细小病毒-呼肠孤病毒二联灭活疫苗。主要内容如下:1、GPV和GRV的分离与鉴定本研究对实验室采集的疑似患有GPV病料、GRV病料进行了病原的分离鉴定,并分别命名为GPV毒株(AHDY株)和GRV毒株(JSXZ株)。对以上两种毒株分别进行了序列的测定与分析、动物回归试验等。通过DNAStar软件对AHDY分离株VP3基因、JSXZ分离株σC基因与相应参考株进行序列同源性比对和进化树的构建。结果表明,AHDY分离株与近年来分离GPV参考株同源性在92.1%以上,与MDPV参考株处于不同的分支上,同源性在74.6%~80.4%。JSXZ分离株的核苷酸序列与水禽源呼肠孤病毒的有很高的同源性,可达95.9%~98.0%,而与鸡源呼肠孤病毒同源性仅42.9%~46.6%。JSXZ分离株与水禽源呼肠孤病毒遗传关系较近,而与鸡呼肠孤病毒遗传关系相对较远。动物回归试验表明,2周龄的健康雏鹅感染以上两种毒株后,可分别表现出与自然发病病例一致的临床症状和剖检变化。表明两株分离毒株较好的免疫原性,可用于二联疫苗的研制。2、GPV和GRV二联灭活疫苗的初步研制及免疫效力试验GPV、GRV种毒进行集中大量扩繁并分别进行毒力测定。将以上两种经透析浓缩的抗原液等体积混合后,与吐温-80以96:4的比例混合,按照油水比2:1进行乳化,制备鹅细小病毒-呼肠孤病毒二联灭活疫苗,理化性状检验、安全性及保质期检验结果显示,符合油乳剂灭活疫苗制备标准。为了评价试制二联灭活疫苗的免疫效力,该疫苗接种非免疫种鹅,对其最小免疫剂量、免疫持续期进行了监测。结果表明,在一定范围内,GPV、GRV血清抗体水平均与免疫剂量呈正相关,而且其抗体水平也均随着免疫时间的延长而逐渐升高。以0.8mL/只免疫种鹅时,至免疫后2周,GPV、GRV血清抗体即可上升至阴阳临界值之上,其中1mL免疫剂量组抗体水平更高。免疫持续期试验结果表明,GPV血清抗体水平免疫后3周上升至较高水平,在免疫后4周上升至最高,直至监测至免疫后8周仍为阳性;GRV血清抗体水平在免疫后3周上升至较高水平,在免疫后5周达到峰值,在免疫后7周血清抗体为阳性,而到免疫后第8周就处于阴阳临界值之下。终上所述,以0.8mL/只免疫种鹅,GPV、GRV血清抗体水平至少持续7周。结果表明,本研究研制的二联疫苗免疫种鹅有良好的免疫原性,为进一步开展二联灭活疫苗的研究提供一定的理论依据。