研究背景与目的:自2020年以来,新型冠状病毒肺炎（Corona Virus Disease 2019,COVID-19）已成为一种严重危害人类健康的全球性流行传染病。新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-Co V-2）是导致COVID-19的致病病毒,该病毒经过多轮变异已经衍生出了德尔塔（Delta）、奥密克戎（Omicron）等不同的病毒株,这向全人类抗击新冠疫情提出了更高的挑战。在全球疫情严重蔓延的关键时期,寻求更加安全、有效、稳定的抗病毒药物已成为COVID-19临床治疗的迫切需求。棘突蛋白S（spike protein）是冠状病毒重要的表面蛋白,由S1亚基和S2亚基两部分构成,且与病毒的感染能力密切相关。目前以S1蛋白的RBD区域作为主要靶点开发抗体药物和疫苗居多。我们通过对比基因序列发现,S1蛋白序列与2003年的重症急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome,SARS）和2012年的中东呼吸综合征（Middle East Respiratory Syndrome,MERS）等相关冠状病毒有一定的相似性,而S2蛋白序列则与包含SARS-Co V-2在内的所有致病性冠状病毒都有高度相似性,这就提示S2蛋白具有更高的保守性,对开发广谱型抗新型冠状病毒的单克隆抗体药物具有重要意义。因此,本研究旨在以SARS-Co V-2的S2蛋白为抗原,利用“磁珠分选单细胞测序”技术以及“噬菌体文库展示”技术从感染过COVID-19的康复者全血中筛选出可以针对包括此次SARS-Co V-2在内的所有致病性冠状病毒的全人源单克隆抗体,以期快速开发出能有效中和杀灭上述病毒的单抗药物。实验方法与结果:1.SARS-Co V-2表面S2蛋白（抗原蛋白）的制备:通过查找文献以及NCBI文库比对合成SARS-Co V-2表面S2蛋白的基因,然后将c DNA序列克隆到表达载体中,再通过改变蛋白的诱导温度和时间确定蛋白表达的最佳条件,并成功制备了S2抗原蛋白,最后经验证确定S2蛋白可用于后续的单克隆抗体筛选。2.单克隆抗体的筛选及制备:收集COVID-19康复志愿者全血,以S2蛋白作为抗原蛋白,分别使用“磁珠分选单细胞测序”和“噬菌体文库展示”技术进行单克隆抗体的筛选,对筛选到的抗体利用酶联免疫吸附实验进行进一步验证,最终将所筛选出的单克隆抗体进行表达和纯化。3.SARS-Co V-2假病毒中和实验:通过构建特异性过表达ACE2的HEK293T稳定细胞株,以及以HIV慢病毒载体和SARS-Co V-2的S蛋白为基础制备的SARS-Co V-2假病毒,对所筛选出的单克隆抗体进行假病毒中和实验,最终测定IC50数值评价抗体中和效价。实验结论:1.成功构建了SARS-Co V-2病毒S2蛋白的原核表达质粒,并利用大肠杆菌系统成功表达及纯化得到S2蛋白,后者作为抗原蛋白可用于后续单克隆抗体的筛选。2.利用“磁珠筛选高通量测序”以及“噬菌体文库展示”技术进行全人源单克隆抗体的筛选,并对筛选出来的抗体进行表达纯化及假病毒中和实验的验证,最终成功制备出两株可杀灭SARS-Co V-2假病毒的特异性全人源单克隆抗体,其IC50分别为12.11μg/m L和25.40μg/m L。