乙醇酸氧化酶40kD与“面具多肽”紧密结合的证据

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乙醇酸氧化酶(EC 1.1.3.15,GO)是植物光呼吸的关键酶。GO只有一种40 kD亚基与多个等电点之间的矛盾进行大量研究,初步证实GO被富含苯丙氨酸的蛋白(phe-rich protein,PPGO)所包裹,形成PPGO-GO复合蛋白。在SDS-PAGE中,不含phe的GO 40 kD向正极泳动,氨基酸组成测定表明其为酸性;而PPGO向负极泳动,为碱性蛋白,其phe占60%-6 5%,使PPGO-GO复合蛋白在258 nm有吸收峰。PPGO-GO复合蛋白抗体只识别PPGO而不识别GO 40 kD亚基,GO 40 kD亚基只被其自身抗体所识别。因此,PPGO-GO复合蛋白抗体只与PPGO有关,与GO 40 kD无关。但奇怪的是,GO 40 kD抗体和PPGO-GO复合蛋白抗体一样,均识别绿叶粗蛋白中54 kD/14 kD等带。另外,GO 40 kD抗体也识别PPGO-GO复合蛋白。如果PPGO-GO复合蛋白出现不彻底解离,以致GO 40 kD亚基仍和PPGO结合在一起,使GO 40 kD抗体实际上还含有PPGO-GO 40 kD抗体,即和PPGO-GO复合蛋白抗体一样均含有PPGO抗原决定簇,可识别PPGO-GO复合蛋白,以及绿叶粗蛋白中54 kD/14 kD等带。为此,论文从菜心(Brassica parachinensis Bailey)绿叶中获得洗脱速度不同的10种强碱性PPGO-GO复合蛋白1-10,均具有GO活性和40 kD主带。其洗脱快慢分别为:PPGO-GO复合蛋白110.0的碱性蛋白。推测酸性40 kD是单独的GO 40 kD亚基;而碱性40 kD是由PPGO和GO 40 kD亚基组成的复合体,此PPGO可能是小分子的多肽,只影响GO 40 kD的等电点却不影响其分子量。 PPGO-GO复合蛋白在SDS-CE中出现分子量小于10 kD的蛋白,258 nm下的响应值比其他蛋白约高4倍,表明此小于10kD蛋白苯丙氨酸含量高。 SDS-醋酸薄膜电泳表明多种模式生物粗蛋白中普通存在PP,且初步实验证明糖蛋白可向负极泳动,而PPGO抗体可与众多菜心粗蛋白起免疫反应猜测不同生物的PP可能是一类蛋白。
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