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为提高昆明白小鼠 ES 细胞建系效率，实验体外培养了小鼠 ES/EG 细胞,对影响小鼠ES/EG 细胞分离与克隆的某些因素进行了探讨。以昆明白小鼠胎儿成纤维细胞为饲养层，低糖 DMEM 添加 15％FBS＋2.2g/L 或 3.7g/L NaCO3＋0.1mM 2-巯基乙醇+2mM 谷氨酰胺＋1000IU/mLhLIF＋100IU/mL 卡那霉素为培养液，分离培养 3～3.5 日龄小鼠胚胎及8.5dpc～12.5dpc 生殖嵴 PGCs 细胞，并 ES/EG 集落进行了鉴定、传代和克隆。主要实验结果如下： 1. 从 712 枚昆明白小鼠早期胚胎中成功分离出 302 个原代 ES 细胞集落，最高传至 9 代；从 184 个胎儿生殖嵴 PGC 细胞中分离出 476 个原代 EG 细胞集落，最高传至 8 代。 2. 在添加浓度为 2.2g/LNaHCO3 的干细胞培养液中胚胎贴壁率、ICM 克隆形成率、ES 克隆形成率分别为 75％、68％和 61％；而在添加浓度为 3.7g/LNaHCO3的干细胞培 养液中胚胎贴壁率、ICM 克隆形成率、ES 细胞集落形成率分别 27％、24％和 8％， 两者差异极显著。 3. 3 日龄桑椹胚和 3.5 日龄囊胚贴壁率、ICM 克隆形成率和 ES 克隆形成率分别为 （30%,30%,18%）和（75%,68%,61%）,两者差异极显著。 4. 自然发情交配获取的囊胚的胚胎贴壁率、ICM 克隆形成率和 ES 克隆形成率（为 90 ％，85％和 83％）均显著高于超数排卵交配获取的囊胚（为 75％，68％和 61％）。 5. 添加外源 LIF 可显著提高 ICM 克隆形成率和 ES/EG 集落形成率，但对胚胎贴壁并无 作用；添加浓度范围在 250－1000IU/ml 时，LIF 作用效果不呈量效关系。 6. 采用“多次消化法”平均每个生殖嵴可得 1.89 个 P0代 EG 细胞集落，而采用“一 次消化法”平均每个生殖嵴仅获 0.68P0代 EG 细胞集落，两者差异极显著。7. 采用方法 III（用 0.1％胰蛋白酶－0.01％EDTA 消化含饲养层的干细胞集落 2min－ 3min 后，轻敲培养皿底部使 ES/EG 集落脱壁，培养液中和后将脱壁的 ES/EG 集落 机械吹散成小细胞团块再转移培养）可获得较高 ES/EG 克隆率和传代数，且方法简 单、易行。