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目的:研究基因重组蛇源去整合素rAdinbitor的抗肿瘤生长作用及其抗肿瘤生长的机制,为以后进入临床应用提供必要的实验室依据。方法:本实验由二部分组成,第一部分是利用基因工程手段,将旅顺产白眉蝮蛇去整合素rAdinbitor的基因在大肠杆菌BL21中表达,并大量培养含有重组蛇源去整合素rAdinbitor基因的大肠杆菌BL21,超声破碎提取含有rAdinbitor的总蛋白,(然后)利用His·Tag亲和层析的方法纯化rAdinbitor。然后,采取小鼠的体内实验,证明rAdinbitor的抗肿瘤生长作用及其抗肿瘤生长的机制。首先制造C57BL/6小鼠肿瘤模型,我们分别利用了黑色素瘤B16和肺癌LLC两种肿瘤株作为rAdinbitor的治疗对象,于接种瘤细胞后第二天,以三种不同剂量梯度的rAdinbitor腹腔注射给药,每天一次,以生理盐水为空白对照,15天后处死小鼠,取瘤,称重,并分别做病理切片观察瘤内血管数量的差异,另外分别取肺组织做病理切片观察肿瘤细胞转移的差异。第二部分是研究rAdinbitor突变体RI(49)A(50)RGD→RPTRGD对FAK-Ras-MEK通路的影响。结果:我们利用基因工程手段成功获得了大量纯化的rAdinbitor,得率为3.42mg/L培养液。小鼠体内实验证明, rAdinbitor剂量分别为0.5mg/kg、1.25mg/kg、5mg/ kg体重小鼠进行治疗后,黑色素B16肿瘤分别被抑制40.0%、78.8%和94.4%;肺癌LLC肿瘤分别被抑制39.6%、71.7%和94.3%。同时,肿瘤的肺转移受到抑制。病理切片显示rAdinbitor能抑制肿瘤的血管生成。三个剂量组分别抑制黑色素B16肿瘤的血管生成达45.9%、71.6%和91.7%;肺癌瘤株中血管生成分别被抑制达44.0%、70.3%和90.7%。Western印迹实验显示rAdinbitor突变体RPTRGD具有去整合素特性,对FAK-Ras-MEK通路起负调控作用,表现为神经胶质瘤C6细胞FAK、Ras、MEK1/2和ERK1/2的表达明显降低,而caspase-3的表达明显升高。结论:(1)基因重组蛇源去整合素rAdinbitor具有典型的去整合素特性,可以抑制血管的生成从而抑制肿瘤的生长。(2) rAdinbitor突变体RPTRGD仍具有去整合素特性,对神经胶质瘤C6细胞FAK-Ras-MEK信号转导通路起负调控作用,并诱导细胞凋亡。