单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)是危害人类健康的常见病原体,分为HSV-1及HSV-2两型,可引起龈口炎、脑炎、角膜结膜炎、生殖器疱疹等疾病,目前尚没有有效的疫苗进行防治,HSV疫苗的研究开发有着重要的现实意义.研究发现HSV包膜糖蛋白可引起HSV的免疫反应,其中糖蛋白D(gD)与感染细胞膜上的受体(HveA、HveC等)结合参与了病毒穿膜的过程,是HSV的最重要的保护性抗原,gD有多个中和表位,能诱导细胞和体液免疫反应,对HSV-1和HSV-2的感染均有保护作用,是HSV疫苗研究的主要对象.本研究对HSV-1包膜gD蛋白在真核Pichia系统的表达、纯化及免疫原性进行了一些探索.首先从提取的HSV-1基因组中扩增得到编码gD蛋白胞外区1~316位氨基酸的基因(gDt),将其插入毕赤酵母表达质粒pPIC9K的醇氧化酶(AOX1)启动子下游,构建携带gDt的重组载体,经电转化GS115菌株和G418筛选,得到了高效分泌表达gDt蛋白的毕赤酵母菌株,表达量达到250mg/L,在此基础上进行了重组酵母菌株的规模化发酵实验,表达量达到2g/L.表达产物经离子交换、金属螯合、分子筛柱层析纯化后得到纯度较高的重组蛋白,目的蛋白可被gD单抗(1-I-9)特异性识别.重组gDt蛋白免疫小鼠诱生了一定水平的特异性抗体,表明该蛋白具有较好的免疫原性,可诱导小鼠产生体液免疫应答.本研究工作的完成为研制和开发HSV基因工程疫苗和免疫学诊断试剂积累了必要的资料,也有助于开展HSV与细胞相互作用等方面的基础研究.