交配是蜱类繁殖过程中的关键环节,诱发雌蜱发生一系列的生理变化,并最终产卵。雄蜱性腺分泌物在交配过程中发挥着十分重要的作用,一方面保护、活化精子,促进授精,刺激卵巢发育和卵黄发生,另一方面对雌蜱的生理行为等产生影响,如诱导雌蜱快速吸血,加速产卵等。本文的综述部分在简要描述雄蜱性腺形态结构和分泌物生化特性基础上,系统阐述了雄蜱性腺分泌物中各种功能因子的研究现状,着重论述其在精子获能、诱导雌蜱吸血、促进雌蜱卵巢发育和卵黄发生方面的进展,并对未来的研究提出了展望,以期为今后此领域研究开拓思路,促进防治工作的开展。本研究以河北省广泛分布的两种硬蜱—长角血蜱和森林革蜱为研究对象。利用体腔注射、酶联免疫分析对饱血雄蜱性腺分泌物的功能活性进行了研究;利用cDNA文库构建、cDNA末端快速扩增、反转录PCR、实时定量PCR技术扩增得到饱血因子的全长序列并对其阶段和组织表达进行了系统分析;利用液相色谱-质谱联用技术对长角血蜱饱血雄蜱性腺蛋白质组进行了分析。以上工作为进一步探索蜱类引发雌蜱交配效应的功能物质以及利用它们开发抗蜱疫苗奠定了基础。为了进一步加深对蜱类饱血因子的了解,并为蜱类饱血因子序列保守性研究提供基础,同样采用cDNA文库构建和cDNA末端快速扩增技术扩增得到了森林革蜱饱血因子的全长序列。主要研究结果如下:1.长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)(1)饱血雄蜱性腺提取液具有刺激处于缓慢吸血期未交配雌蜱进入快速吸血期,从而快速饱血脱落的功能,表现在饱血时间短,饱血率高,对饱血体重方面影响显著。(2)饱血雄蜱性腺提取液具有促进卵巢发育,促进外周脂肪体合成卵黄原蛋白,促进卵巢摄取卵黄蛋白的功能。(3)不同注射剂量的饱血雄蜱性腺提取液在雌蜱的饱血体重,卵巢重量,外周脂肪体合成卵黄原蛋白,卵巢摄取卵黄蛋白方面无明显差异。仅高剂量实验组在饱血体重和卵黄原蛋白两方面有差异。(4)根据体腔注射饱血雄蜱性腺提取液得到的实验结果与正常交配相类似,而在交配中雄蜱的交配功能物质进入的是雌蜱生殖道,本实验中提取液进入的是雌蜱的血淋巴,因此推断雄蜱交配功能物质在雌蜱体内的运输循环途径是随精液进入雌蜱生殖道后透过生殖道管壁,进入血淋巴中,通过血淋巴的循环到达靶组织,发挥功能。(5)成功构建高质量的饱血雄蜱性腺cDNA文库,初级文库库容量是1.71×106,扩增文库的库容是2.8×108。(6)成功扩增得到饱血因子HlEFα的全长序列(HQ908090),全长647 bp,开放式阅读框起始于116位终止于572位,共编码152个氨基酸。(7)发育10天后的卵,处于饥饿期的幼蜱、若蜱、雌蜱、雄蜱均不表达HlEFα,吸血96h的未交配雌蜱各组织均检测不到HlEFα。交配前后雌蜱卵巢的HlEFα含量变化不大。(8)吸血或者雄蜱性腺发育成熟是HlEFα合成的必要条件(饥饿期无,饱血后有),推断合成部位是雄蜱的精巢/输精管。(9)对cDNA文库进行随机筛选得到雄蜱饱血性腺的一些基因序列。(10)对饱血雄蜱性腺总蛋白进行LC-MS分析,经比对得到此时期此组织部分蛋白组成,建议以后的实验采用双向电泳进行初步分离后再进行LC-MS分析。2.森林革蜱(Dermacentor silvarum)(1)成功构建高质量的饱血雄蜱性腺cDNA文库,初级文库库容量是2.17×106,扩增文库的库容是3.5×108。(2)成功扩增得到饱血因子DsEFα的全长序列(HQ908089),全长672 bp,开放式阅读框起始于127位终止于580位,共编码151个氨基酸。(3)对cDNA文库进行随机筛选得到雄蜱饱血性腺的一些基因序列。(4)对目前已知的长角血蜱、森林革蜱、具尾扇头蜱(Rhipicephalus appendiculatus)、希伯来花蜱(Amblyomma hebraeum)、变异革蜱(Dermacentor variabilis)的饱血因子蛋白序列进行比对分析,结果显示5个饱血因子序列相似性与它们进化上的亲缘关系一致,即亲缘关系越近序列相似性越强。革蜱属与具尾扇头蜱属之间的保守性很强,这与它们在属级进化分支上属于同一支相关。