应用复合MS-PCR法快速检测线粒体DNA编码区单核苷酸多态性的研究

来源 :四川大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:fishe1042
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:为提高线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)遗传标记的个人识别能力和非母排除能力,筛选线粒体DNA编码区频率较好的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism SNP)基因座,利用复合MS-PCR(multiplexed mutagenically separated PCR)技术、银染分型,建立线粒体DNA编码区10个SNP基因座复合扩增分型系统,以期为法医鉴定提供mtDNA-SNP新的遗传标记和新的检测手段,并探讨其应用价值;同时调查160例中国成都无关汉族个体mtDNA编码区10个SNP基因座等位基因频率和单倍型分布情况,为群体遗传学提供新的数据。方法:从线粒体DNA编码区筛选多态性较好的10个SNP(T12705C,G8701A,A8584G,T10400C,T4883C,C10873T,A15301G,C14783T,A3010G,A5460G)基因座。针对每个SNP基因座分别设计两条片段相差3~4个碱基的等位基因特异性引物和一条公共引物,优化扩增条件,使10个SNP基因座同时在一管中扩增,PCR产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显带后分析样本的基因型。应用直接测序技术以T12705C、C10873T和A5460G基因座为例研究该方法检测的准确性。结果:本研究成功建立了10个mtDNA-SNP基因座复合扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显带分型的方法;不同SNP基因座为长度不同的单一谱带,其分型结果与直接测序一致;用上述方法对成都汉族160名无关个体10个mtDNA-SNP基因座进行了准确分型,分型结果可靠,重复性好。10个mtDNA-SNP基因座C12705T、A8701G、G8584A、C10400T,T4883C、C10873T、A15301G、C14783T、A3010G、A5460G等位基因频率分别为0.382/0.618、0.482/0.518、0.825/0.175、0.494/0.506、0.169/0.831、0.513/0.487、0.538/0.462、0.506/0.494、0.163/0.837、0.09/0.91,共检出18种单倍型,单倍型的基因多样性为0.8617,偶合概率值为0.1437。结论:本研究通过自行设计的10套引物,成功的构建了10个线粒体SNP基因座复合MS-PCR扩增、银染分型体系。为提高mtDNA-SNP基因座的个人识别能力和非母排除能力提供了一种简单、快速、准确、经济、有效的SNP分型新方法;对建立线粒体DNA-SNP数据库,为线粒体SNP基因座在考古学、进化学和法医学个人识别和亲子鉴定提供了方法学和群体遗传学基础。
其他文献
《语文课程标准》指出:在语文学习过程中,要提高文化品位和审美情趣.让学生受到高尚情操与趣味的熏陶,发展个性,丰富自己的精神世界。这一定位决定了语文课堂教学的本质,不再是教师
近几年,我国水利水电工程建设规模获得了显著提升,在这当中,水工金属结构制造和安装质量控制是有关行业中的从业人员重点关注并不断钻研的课题,因为水工金属结构制造和安装质
1.大鼠脑组织缺血后Ngb mRNA表达与缺血时间推断的研究目的:探讨大鼠脑组织缺血后不同时间脑红蛋白(Neuroglobin,Ngb)mRNA表达,旨为法医病理学实践中推断损伤时间提供科学的
物理学是一门以实验为基础的自然科学,遇到知识难点,可尝试利用实验突破.初中物理"大气压强"教学解释有关现象时,会简单地说成大气压强的作用,很抽象,学生理解难,成了教学的
目的:尿路感染(UTI)患者血清微量元素改变与炎症细胞因子、氧化应激指标的相关性。方法:选择在我院诊断为下尿路感染的患者作为UTI组、体检的健康志愿者作为对照组,采集血清
G—patch是广泛存在真核生物蛋白质中的保守结构域,含有六个高度保守的甘氨酸残基,推测它是一种RNA结合结构域,其功能与RNA代谢有关。
为提高棉织物织物喷墨印花产品质量为目的,对棉织物活性染料数码印花上浆工艺进行了研究,分析上浆配方工艺参数对棉织物数码印花效果的影响。测试了不同参数条件下产品喷墨印
血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶(SGK)是一种新发现的丝/苏氨酸蛋白激酶,与其他蛋白激酶显著不同的是.SGK的转录、活性和在细胞内定位受到不同因素的调节,是多种胞内信号途径的交汇