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柑橘衰退病是由柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)引起的一种具有经济重要性的柑橘病毒病害,广泛分布于世界各柑橘产区。我国是柑橘生产大国,种植面积居世界第一,产量居世界第二。随着20世纪80年代后期我国进行柑橘产业结构调整,加大了柚类和甜橙的种植比例,CTV茎陷点型毒株对柚类和某些甜橙的危害变得日益严重。国外的防治经验表明,在CTV强毒株和强传媒橘蚜并存的地区,弱毒株的交叉保护(MSCP,Mild Strain Cross Protection)是最有效的防治方法。建立一种快速、准确的定量检测CTV的方法不仅对预测CTV的发生和流行具有现实意义,而且对田间不同CTV株系侵染力的鉴定具有指导意义,同时运用该方法有助于对MSCP防治机理的深入研究。本研究基于CTV基因组同源性较高的3′端设计筛选引物,运用SYBR GreenⅠ荧光染料法建立一种检测CTV的实时荧光RT-qPCR(Reverse Transcription and quantitative PolymeraseChain Reaction)体系,并应用于检测田间不同致病力的CTV株系。同时运用该方法建立了针对CTV强毒株CT14和弱毒株CT11的MSCP防效检测体系,对25头和50头蚜虫接种强毒分离株后的拮抗效果进行研究。主要研究结果如下:1.在国内首次建立了检测CTV的实时荧光RT-qPCR体系,该体系具有污染几率小(全封闭体系反应)、快速(整个过程只需要2.5h)、操作和实验设计简单、成本较低等优点。2.该体系特异性强(对碎叶病、温州蜜柑萎缩病和鳞皮病无特异性扩增),线性范围宽(8×10~2～8×10~8拷贝/μL,r~2=1.000),灵敏性高(最低检测限为8×10~0贝/μL,比常规PCR灵敏100倍),重复性好(批内CV值1.6%,批间CV值3.2%),是CTV定量分析的有效手段。3.运用该体系对田间样品的检测结果表明该体系能稳定检测到田间受不同致病力感染的CTV株系,对田间的攻毒检测有指导意义。4.根据CTV全基因组的T3K17区域设计筛选出一对引物(TQ1和TQ2)来区分CTV强毒株CT14和弱毒株CT11,同时筛选了2对参考基因ACT2和18S rRNA作为相对定量表达分析的内参,分别建立了3个基因各自的普通PCR和实时荧光RT-qPCR检测体系,前者能稳定扩增出目的基因;后者能准确可靠的对目的基因进行定量。5.首次运用实时荧光RT-qPCR技术对免疫接种了弱毒株的植株拮抗接种后CTV强毒株的时空分布进行了定量检测研究,结果表明,弱毒株CT11能够完全拮抗或延迟CT14的侵入或感染进程,具有一定的保护效果,并且攻毒成功的植株体内强弱毒株的含量互成消长关系。50头蚜虫攻毒的强毒株检出率明显高于25头攻毒的;同一处理中不同植株间,以及在同一植株不同部位强毒株的检出率存在差异;强毒株在植株体内不同部位的检出率依次为嫩皮→嫩叶→老皮→根→老叶。