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目的检测3%过氧化氢干预HCM-C心肌细胞建立氧化损伤细胞模型中自噬因子Beclin-1、LC3-Ⅱ、ULK1及凋亡因子Bax、caspase3的表达情况,以此分析损伤过程中自噬、凋亡的作用,进而探讨氧化应激所致心肌细胞损伤中自噬与凋亡的相关性及临床意义。方法1、培养HCM-C人心肌细胞,根据其生长状况进行传代,取对数生长期的细胞进行实验。采用3%过氧化氢干预HCM-C心肌细胞,建立氧化损伤细胞模型。设计慢病毒Beclin1 RNA干扰序列稳定转染HCM-C心肌细胞,建立转染细胞模型,及应用100nmol/L雷帕霉素干预HCM-C细胞,建立自噬增强模型。实验分为空白组(control)、过氧化氢组、转染+过氧化氢组、雷帕霉素+过氧化氢组4个组。2、采用Real-time PCR及Western Blot在mRNA和蛋白质水平上检测四组细胞中自噬因子Beclin-1、LC3-Ⅱ、ULK1及凋亡因子Bax、caspase3的表达情况。采用流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡情况,及细胞计数试剂盒8 (CCK-8)检测各组细胞增殖及存活情况。结果1、通过预实验,将3%H2022.3ul加入10% DMEM (含胎牛血清)培养基10ml中,配成终浓度200umol/L,加入HCM-C心肌细胞内培养6h,建立氧化应激下心肌细胞损伤模型最为合适。2、H2O2 组与对照组比较,Beclin-1、LC3-Ⅱ、ULK1、Bax、caspase3 表达升高,凋亡率升高,而存活率明显降低。3、转染 Beclin1+H202组与 H202组相比,Beclin-1、LC3-Ⅱ、ULK1 表达减低,Bax、caspase表达升高,其凋亡率明显高于H202组,存活率也明显升高。4、雷帕霉素+H2O2组与H2O2组比较,Beclin-1、LC3-Ⅱ、ULK1表达升高,Bax、caspase表达减低,凋亡率明显降低,同时存活率亦明显降低。结论1、过氧化氢诱导HCM-C心肌细胞氧化损伤的过程中,自噬增强,凋亡增加。2、过氧化氢所致心肌细胞氧化损伤过程中,自噬、凋亡相互拮抗,共存于特定细胞死亡过程中。自噬、凋亡程序都会被启动,此过程中自噬发挥着主要作用。3、氧化应激下,自噬作为一种损伤因素而存在。心肌细胞为了适应环境的变化而发生自噬性死亡,当自噬被抑制后,细胞存活率增高。