论文部分内容阅读
目的研究LKB1对肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma cells,HCC)活性的影响及对其上皮-间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用。方法Western blot法检测HCC细胞系SNU449和正常肝脏细胞系HL7702内LKB1蛋白的表达情况。实验分为:Control组(空白对照组)、NC-shRNA组(空质粒转染组)、LKB1-shRNA组(LKB1-shRNA转染SNU449细胞),MTT法检测细胞活性,实时荧光定量反转录酶-聚合酶链锁反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测LKB1、E-cadherin、N-cadherin的mRNA表达水平,Western blot法检测LKB1、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量的变化。结果1、LKB1蛋白在SNU449和HL7702中的表达情况:Western blot结果显示LKB1蛋白在SNU449细胞中相对表达量为:0.58±0.13。在HL7702细胞中相对表达量为:0.86±0.11。HL7702细胞中LKB1的表达较SNU449明显升高(P<0.05,图1)。2、LKB1-shRNA转染对SNU449细胞中的LKB1影响:RT-PCR显示,LKB1-shRNA转染后Control组较NC-shRNA转染组LKB1的mRNA表达量无明显变化,LKB1-shRNA转染组SNU449细胞中的LKB1的mRNA表达量较NC-shRNA转染组明显降低(P<0.05图3);Western blot结果显示LKB1蛋白在Control组、NC-shRNA转染组、LKB1-shRNA转染组中相对表达量分别为:0.55±0.11、0.51±0.07、0.28±0.13。Control组较NC-shRNA转染组无明显变化,但是LKB1-shRNA转染组较NC-shRNA转染组表达明显降低(P<0.05图4)。3、LKB1-shRNA转染对SNU449细胞活力的影响:MTT结果显示:三组分别检测1d、2d、3d、4d、5d各组细胞OD值,Control组细胞活力较NC-shRNA组无明显变化,LKB1-shRNA组较NC-shRNA转染组中SNU449细胞活力随着细胞培养时间明显增高(P<0.05图5)。4、LKB1-shRNA转染对SNU449细胞中的E-cadherin、N-cadherin影响:RT-PCR显示,LKB1-shRNA转染后Control组较NC-shRNA转染组E-cadherin、N-cadherin的mRNA表达量无明显变化,LKB1-shRNA转染组SNU449细胞中的E-cadherin的mRNA表达量较NC-shRNA转染组明显降低,N-cadherin的mRNA表达量较NC-shRNA转染组明显增高(P<0.05图6)。Western blot结果显示E-cadherin蛋白在Control组、NC-shRNA转染组、LKB1-shRNA转染组中相对表达量分别为:0.69±0.12、0.75±0.09、0.21±0.14。Control组较NC-shRNA转染组无明显变化,但是LKB1-shRNA转染组较NC-shRNA转染组表达明显降低(P<0.05图7)。N-cadherin蛋白在Control组、NC-shRNA转染组、LKB1-shRNA转染组中相对表达量分别为:0.22±0.05、0.24±0.08、0.86±0.12。Control组较NC-shRNA转染组无明显变化,但是LKB1-shRNA转染组较NC-shRNA转染组表达明显增高(P<0.05图7)。结论1、正常肝细胞中LKB1表达量高于HCC细胞。2、沉默LKB1能够促进HCC细胞的增殖。3、LKB1可能参与HCC细胞EMT调节。