【摘 要】
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目的： 探索重组人天冬氨酸-β-轻化酶（aspartate-β-hydroxylase， AAH)基因树突状细胞(dendriticcells，DCs)疫苗诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxicity Tlymphocytes, CT
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目的： 探索重组人天冬氨酸-β-轻化酶（aspartate-β-hydroxylase， AAH)基因树突状细胞(dendriticcells，DCs)疫苗诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxicity Tlymphocytes, CTLs)免疫应答对人肝癌细胞株SMMC-7721的体内外抑制作用及相关机制。 方法： 重组腺病毒体外感染小鼠骨髓源性DCs制备抗原特异性DCs疫苗，分三组：重组腺病毒Ad-AAH-IRES2-EGFP感染DCs组(AAH-DCs组），空腺病毒Ad-IRES2-EGFP感染DCs组（GFP-DCs组）和无病毒感染组（Blank DCs组）。采用Western blot检测DCs疫苗中AAH蛋白的表达。将疫苗分别通过皮下注射方式免疫C57BL/6小鼠，同时设无疫苗注射组（P B S缓冲液代替疫苗），共分为四组：AAH-DCs疫苗诱导组（AAH-DCs-CTLs组）、GFP-DCs疫苗诱导组(GFP-DCs-CTLs组）、空白DCs诱导组（DCs-CTLs组）、无疫苗组(P B S组）。乳酸脱氢酶释放水平评估各组CTLs体外裂解肝癌细胞株SMMC-7721的效应；SMMC-7721皮下注射裸鼠建模后对应分为4组， CTLs处理后观察皮下肿瘤生长情况；第21d处死裸鼠，收集肿瘤组织和脾脏，分别采用real-time PCR和 Western blot检测瘤体组织中Caspase3、Bax和Bcl-2的表达，免疫组化染色法检测裸鼠脾脏组织中CD3+T淋巴细胞的表达。 结果： 成功制备DCs疫苗，AAH-DCs组DCs中可检测到AAH蛋白（?86kD)的表达，而GFP-DCs组和Blank DCs组均无AAH蛋白表达。AAH-DCs-CTLs组的CTLs对SMMC-7721细胞的体外裂解效应明显高于GFP-DCs-CTLs组、DCs-CTLs和PBS组。第21d荷瘤小鼠中AAH-DCs-CTLs组肿瘤平均体积和瘤重最小(P＜0.05);real-time PCR和Western blot结果显示与其他组相比，AAH-DCs-CTLs组肿瘤组织中Caspase3、B ax表达水平增高，而Bcl-2降低；免疫组化结果显示AAH-DCs-CTLs组脾脏组织中CD3+T淋巴细胞阳性表达结果显著高于GFP-DCs-CTLs组（P＜0.05)，而DCs-CTLs及PBS组均呈阴性表达。 结论： AAH-DCs疫苗诱导产生的CTLs能够杀伤表达AAH的肝癌细胞SMMC-7721，并通过促细胞凋亡的机制抑制裸鼠肝癌皮下移植瘤的生长。
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