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目的:脑血管病是临床多发病、常见病之一,给社会和家庭带来沉重的医疗负担。环维黄杨星D(CVB-D)是从黄杨木中提取得到的生物碱单体,具有改善脑缺血、心肌缺血等作用,目前以CVB-D为主的黄杨宁片是临床上治疗心脑血管疾病的一线用药,然而,其水溶性差生物利用度低。此外血-脑屏障(BBB)的存在,阻挡了大部分药物的入脑转运,限制了其疗效。脂质体作为近年来制剂学领域的研究热点,具有生物相容性好,降低毒副作用,提高靶向性等优势,因此选择脂质体作为递送CVB-D的载体,可有效避免上述缺点。在前期研究基础上,我们发现相比于灌胃和静脉给药,鼻腔给药更具有脑靶向性。因此依据鼻黏膜与血脑屏障的特殊生理特征,选择鼻腔给药结合制剂学修饰,以期提高CVB-D的脑靶向性。综上所述,本课题基于前期研究基础上,制备具有脑靶向性的CVB-D脂质体,并作出制剂学评价。后期,建立体外血脑屏障模型,评价制剂体外脑靶向性,并应用微透析采样技术,开展血脑同步的药动学研究,探讨环维黄杨星D靶向脂质体鼻腔给药在脑靶向性方面的作用。方法:环维黄杨星D HPLC分析方法的建立CVB-D结构不含有共轭双键,无法直接采用紫外检测器检测。根据其结构中含有仲氨基的特点,以异氰酸苯酯作为衍生剂,柱前衍生化后采用高效液相色谱法建立分析方法,并作方法学考察。Angiopep-2修饰吐温-80包裹的环维黄杨星D靶向脂质体的制备及制剂学评价前期通过核磁共振确证磷脂聚乙二醇马来酰亚胺(DSPE-PEG-MAL)与Angiopep-2的连接,采用薄膜蒸发—探头超声法制备脂质体,以包封率为指标单因素考察优化磷脂与胆固醇的质量比,磷脂与CVB-D的质量比,探头超声时间,磷脂与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG2000)的摩尔比,磷脂与吐温-80的摩尔比。并通过脂质体形态,粒径,电位,多分散系数(PDI),稳定性和溶血性等进行制剂学评价。环维黄杨星D脂质体的体外靶向性评价永生化小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)构建体外血脑屏障(BBB)实验模型,通过测量膜两侧电阻值,4h液面试漏试验,以及辣根过氧化物酶(HRP)通透性试验评价血脑屏障的建立。MTT细胞毒性试验筛选给药的安全浓度后,分别在血脑屏障模型的上层给予CVB-D溶液,CVB-D普通脂质体和CVB-D靶向脂质体,检测透过血脑屏障的药物的量以评价制剂的体外靶向性。环维黄杨星D HPLC-MS/MS分析方法的建立CVB-D的水溶性差,而微透析灌流液为水性灌流液,因此在生物样品中CVB-D的含量极低,高效液相色谱法无法满足分析要求,因此建立了CVB-D HPLC-MS/MS分析方法。环维黄杨星D脂质体的体内靶向性评价CVB-D靶向脂质体、CVB-D普通脂质体、CVB-D溶液和股静脉给予CVB-D靶向脂质体后,不同时间点采集血液和脑脊液样品,测定药物含量,并分析药动学参数和脑靶向指数,评价其脑靶向性。成果:1、建立了环维黄杨星D的HPLC分析方法色谱条件仪器:岛津LC-20A;色谱柱:依利特C18(200×4.6,5μm);Phenomenex C18保护柱(4×2.0 mm);流速:1mL/min;流动相:甲醇:水=85:15;柱温:室温;进样量:10uL;检测波长:240nm;2、优化了脂质体制备工艺磷脂与CVB-D质量比为20:1;磷脂与胆固醇质量比为7:1;磷脂浓度20㎎/mL;探头超声超3S停3S,共3min;磷脂与DSPE-PEG2000的摩尔比为1:0.1;磷脂与吐温-80的摩尔比为1:0.2。CVB-D靶向脂质体的粒径为(72.03±0.33)nm,zeta电势为(-15.23±0.61)mV,PDI为(0.301±0.01),包封率为(92.39±1.29)%。3、建立体外血脑屏障,并评价体外脑靶向性细胞电阻值大于200Ω.cm~2,4小时渗漏试验液面差大于0.5cm,辣根过氧化物酶通透率小于5%,证明BBB模型的成功建立。药物跨膜转运试验结果表明,CVB-D靶向脂质体有(70.15±1.23)%的药量能够通过血脑屏障,与CVB-D溶液和CVB-D普通脂质体相比具有显著性差异。4、建立微透析采样方法,评价体内脑靶向性通过微透析采样技术同时收集脑透析液和血液透析液,样品经前处理后进入HPLC-MS/MS分析,并通过比较AUC脑/AUC血液、DTI%、DTP%等参数表明,环维黄杨星D靶向脂质体结合鼻腔给药具有脑靶向性。