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自从上世纪50年代早期腺病毒被发现以来,它已被人们广泛的研究。由于腺病毒作为基因转移的载体有许多优点,现已被广泛的应用于基因治疗。本实验利用腺病毒作为载体介导目的基因bcl-2 到人肝细胞中。Bcl-2基因是细胞凋亡程序中重要的抗凋亡基因。镉可以诱导机体多种组织细胞发生凋亡。本文对腺病毒介导的 bcl-2基因抑制镉诱导的细胞凋亡做了如下工作:
1 重组腺病毒载体的构建采用分子克隆的方法构建含有目的基因 bcl-2的穿梭载体pAdTrack-CMV,然后利用细菌内同源重组法构建重组腺病毒载体AdEasy-1,把 bcl-2基因克隆到腺病毒载体上。最后用磷酸钙转染法把重组腺病毒载体转染到 HEK-293 细胞中包装。结果显示:重组腺病毒载体在 HEK-293 细胞中包装成功,出现病毒噬斑。
2 bcl-2基因抗镉诱导细胞凋亡的研究将在 HEK-293 细胞中包装好的重组腺病毒转染人肝细胞 WRL-68 细胞,通过Western blot 法检测 Bcl-2 蛋白的表达。通过 MTT 法、AO/EB 染色法、流式细胞术、Western blot 检测重组腺病毒介导表达的 Bcl-2 蛋白的抗凋亡特性。
我们开创性地以腺病毒作为载体介导bcl-2基因到人肝细胞中,成功表达出 Bcl-2 蛋白。这在研究应用腺病毒作为基因转移的载体进行基因治疗有潜在的应用价值。研究镉诱导的细胞凋亡对于镉的分子毒理学机制的阐明和镉所致的致癌机理的研究具有重要意义。