电针足阳明经(穴)对大鼠胃黏膜细胞损伤修复相关蛋白分子的探讨

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目的:观察电针足阳明胃经“四白”、“梁门”、“足三里”穴对促进大鼠胃黏膜损伤的修复效应,探寻针刺治疗的特异相关蛋白质分子。方法:应用乙醇灌胃法造成胃粘膜损伤大鼠模型。用电针对胃粘膜损伤大鼠“四白”、“梁门”、“足三里”穴治疗10天。采用链霉蛋白酶消化法分离胃黏膜细胞,超声破碎法提取蛋白质。用双向凝胶电泳技术获得空白组、模型组、电针胃经穴组和电针对照点组大鼠胃粘膜细胞蛋白质双向凝胶电泳图谱,通过对比分析各组的差异蛋白点,取有意义的点做质谱鉴定;应用SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术获得空白组、模型组、电针胃经穴组和电针对照点组大鼠胃粘膜细胞蛋白质表达指纹图谱。从而找出与电针效应特异相关的蛋白质信号分子,为进一步阐明针刺参与胃黏膜损伤修复的复杂网络调节机制提供理论依据。结果:①经比较,模型组大鼠胃黏膜损伤指数最高,空白组大鼠胃黏膜损伤指数最低,两组间差异有显著性意义(p<0.05),说明造模是成功的;电针胃经穴组和电针对照点组大鼠胃黏膜损伤指数均明显降低,与模型组比较有显著性差异(P<0.05),其中电针胃经穴组大鼠胃黏膜损伤指数降低最为明显,与电针对照点组比较有显著性差异(P<0.05)。②将空白组、模型组、电针胃经穴组和电针对照点组分别进行比较,找出都有的差异的蛋白点7个(P<0.05),做质谱鉴定,共鉴定出6个蛋白质。③模型组与空白组比较共有4个蛋白质有显著性差异(P<0.05),其中两个蛋白质质/荷比峰明显升高,两个蛋白质质/荷比峰明显降低;电针胃经穴组与模型组比较共有4个蛋白质有显著性差异(P<0.05),其中1个蛋白质质/荷比峰明显升高,3个蛋白质质/荷比峰明显降低;电针对照点组与模型组比较共有5个蛋白质质/荷比峰有显著性差异(P<0.05),其中2个蛋白质质/荷比峰明显升高,3个蛋白质质/荷比峰明显降低;电针胃经穴组与电针对照点组比较共有12个差异蛋白质质/荷比峰(P<0.05),都表现为升高。④10777.71u、3727.126u这两个蛋白质质/荷比峰在模型组与空白组、电针胃经穴组与模型组、电针胃经穴组与电针对照点组比较都有明显的差异变化(P<0.05),说明10777.71u、3727.126u这两个蛋白质可能是针刺治疗胃粘膜损伤大鼠损伤修复的特异效应物质。⑤从实验结果来看,通过双向凝胶电泳-质谱技术鉴定出的差异蛋白主要分布在中、高分子量的蛋白质。而SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术分离出来的差异蛋白峰主要分布在分子量较小的低丰度蛋白质。所以两实验的结果没有找到分子量相同或相近的差异蛋白质。结论:①电针足阳明经(穴)可促进大鼠胃黏膜损伤的修复,提示其与胃具有相对的特异性联系。②鉴定出的6个蛋白质可能通过各种作用通路,如细胞凋亡,发挥损伤和抗损伤修复的作用。电针治疗能够升高或降低这些蛋白质,说明电针可能是通过调节这些蛋白发挥治疗作用的。③建立的细胞蛋白质指纹图谱能够为空白组大鼠、乙醇所致胃粘膜损伤大鼠、电针胃经穴组大鼠和电针对照点组大鼠在筛选特异蛋白质生物标志物方面具有一定价值,为电针治疗胃粘膜损伤大鼠损伤修复机制提供理论依据。
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