APOBEC3G真核算达载体构建及其抗乙型肝炎病毒复制的初步研究

来源 :徐州医学院 徐州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:netproxy_cisheng
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目的:构建人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)真核表达载体,并探讨其抗乙型肝炎病毒(HBV)复制的作用。   方法:   1.采用RT-PCR技术从健康人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆APOBEC3G基因编码区片段,构建pcDNA3.1-A3G真核表达载体,经HindIII和EcoRI双酶切初步鉴定后,送测序;将真核表达载体pcDNA3.1-A3G分别转染HepG2和HL7702细胞,采用PT-PCR、免疫细胞化学、Western blot检测APOBEC3G真核细胞中的表达情况。   2.利用脂质体转染法将真核表达载体peDNA3.1-A3G转染能分泌HBV的HepG2.2.15细胞,分别于转染后24h、48h、72h,收集细胞培养上清液和细胞总蛋白,Western blot检测HBx蛋白表达情况,ELISA法检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg表达情况。   结果:   1.测序结果显示pcDNA3.1-A3G真核表达载体中APOBEC3G序列正确,经RT-PCR、免疫细胞化学、Western blot检测到APOBEC3G在HepG2和HL7702真核细胞中基因转录和表达。   2.HepG2.2.15细胞经APOBEC3G蛋白干扰后,HBx、HBsAg和HBeAg表达量逐渐降低,于72h见表达量显著降低。   结论:   1.成功构建了APOBEC3G真核表达载体pcDNA3.1-A3G;   2.APOBEC3G在体外可以抑制HBV复制,为深入研究APOBEC3G作为抗HBV药物提供实验基础。  
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