论文部分内容阅读
目的:多囊卵巢综合征（PCOS）是育龄女性常见异质性内分泌代谢疾病,其确切病因不明。本研究通过建立具有PCOS高雄激素表型的小鼠模型,对其卵巢组织进行基因芯片分析,筛选差异表达基因并在PCOS患者中进行验证,初步探讨高雄激素表型PCOS可能的发病机制。方法:于成年雌性ICR小鼠（8周龄）妊娠第16-18天,每日皮下注射350μg双氢睾酮（DHT）,出生雌性后代为PNA（Prenatally androgenized）小鼠模型。通过动情周期检测、血清睾酮测定、卵巢HE染色及各级卵泡计数,证实其具备高雄激素、排卵障碍等PCOS特征。对PNA小鼠的卵巢组织进行基因芯片分析,筛选差异表达基因,通过qRT-PCR、免疫组化及Western blot进行验证。自2016年1月至12月从南京鼓楼医院生殖医学中心招募高雄激素表型PCOS患者及年龄匹配的对照,PCOS的诊断基于2003年鹿特丹诊断标准。本研究中所有PCOS患者均出现月经紊乱及高雄激素的临床或血清学表现,并经超声检查明确诊断多囊卵巢。于取卵日抽取静脉血、收集卵母细胞周围的颗粒细胞,提取颗粒细胞RNA,通过q RT-PCR验证差异基因的表达。结果:成年PNA小鼠动情周期紊乱,表现为动情期及动情后期延长、动情前期缺失。成年PNA小鼠血清睾酮水平升高,其卵巢窦卵泡数量增加,卵泡计数提示其出现过多卵泡发育且不排卵现象。使用基因芯片分析技术,在PNA小鼠的卵巢中筛查出1188个差异表达基因,包括671个上调基因和517个下调基因。通过q RT-PCR验证了5个差异表达基因（Aldh1a7,Bhmt,Mtr,Nrcam,Ptprg）。免疫组化及Western blot分析证实PNA小鼠卵巢中MTR表达降低。此外,q RT-PCR的结果显示高雄激素表型PCOS妇女颗粒细胞中的MTR表达降低。在PNA小鼠和PCOS高雄激素表型妇女血清中,MTR下游产物腺苷蛋氨酸（SAM）浓度降低。结论:1、ICR品系PNA小鼠在3月龄时能最大程度的吻合PCOS高雄激素表型患者临床表现,其卵巢出现过多卵泡发育现象。2、本研究发现MTR在PNA小鼠和PCOS高雄激素表型妇女卵巢中的表达降低。3、MTR的表达下调及SAM的降低,提示PCOS高雄激素表型可能与异常的一碳代谢相关。