刚毛柽柳(Tamarix hispid)为灌木或小乔木，具有强的抗旱、耐盐、耐水湿、抗沙埋能力，是优良的防风固沙、水土保持和盐碱地造林树种。而且能在含盐量1％的盐碱地上形成自然林，为盐碱土指示植物，是进行植物抗盐碱研究的理想材料。本文研究了刚毛柽柳在盐碱胁迫后不同时间点基因的表达，并克隆出抗逆相关基因。 刚毛柽柳在0.4 mol/LNaHCO<,3>胁迫下，分别处理0h(对照)、24 h和52h，以叶片为材料，分别构建了3个全长cDNA文库。文库的滴度分别为7.5×10<5>pfu、2.6×10<6>pfu、4.0×10<6>pfu，插入片段平均长度分别为1.1、1.2和1.2 kb，平均重组率为97.5％。 共获得9447条高质量的ESTs序列，其登录号为EH048198-EH057644。它们代表了3945条单一基因序列(Unigene)，包括986个contigs和2959个singlets。3个文库具有的Unigene分别是1752、1558和1675。将9447条EST序列与GenBank的Nr数据库进行Blastx和Blastn分析，其qb7365条ESTs(占77.96％)与已知基因序列相似性高(E-value<10<-4>)，其余2082(22.04％)条相似性低或没有相似性。与已知基因序列相似性高的7365条序列按功能分为12类，其中光合(photosynthesis)占20.31％，功能未知(functionunknown)占13.97％、细胞防御(Cell rescue，defense)占13.96％、能量(Energy)占7.59％、蛋白质合成(Protein synthesis)占7.58％、转运(Transport facilitation)占7.28％、转录(Transcription)占6.63％、细胞结构(Cell structure)占6.07％、代谢(Metabolism)占5.70％、蛋白质定位(Protein destination)占5.02％、信号转导(Signaltransduction)占3.86％、细胞生长/分裂(Cell growth，division)占2.04％。 通过对3个cDNA文库分别进行EST分析和比较建立了NaHCO<,3>胁迫不同时间点的柽柳基因表达谱，鉴定了大量的盐碱胁迫响应基因。这些基因按功能可以分为：渗透调节、激素信号转导、活性氧清除、转录调控、蛋白合成和定位、离子平衡、核糖体蛋白、光合作用和代谢等。提示这些途径都可能参与了刚毛柽柳的耐盐碱胁迫。 在文库中选择了9个表达明显差异的基因，利用实时定量(real time)RT-PCR技术，研究比较了这些基因在NaCl和NaHCO<,3>胁迫下基因表达模式，发现在NaCl或NaHCO<,3>胁迫24 h后这些基因表达趋势比较相似。但在胁迫52 h后，这些基因对NaCl和NaHCO<,3>胁迫响应表达趋势出现明显差异。 文库中含有较多的抗逆相关全长基因，从中选择了液泡膜H<+>-ATPase C、c″亚基和2个GRP(glycine-rich RNA-binding protein)基因，对它们在NaHCO<,3>和NaCl胁迫下基因的表达进一步的分析。NaCI胁迫后 ThVHA cl和 Th VHA c″1，表达量明显增加，ThGRP1和ThGRP2基因表达量下降；NaHCO<,3>胁迫后 Th VHA cl 和 ThVHA C″1的表达量在24 h下降，52 h上升，而ThGRP1和ThGRP2为24 h上升，52 h下降。 本研究发现刚毛柽柳对盐碱胁迫的响应涉及多个生理和代谢途径，并鉴定了一系列胁迫应答基因。这些结果可以作为木本植物耐盐的分子遗传研究的模式系统，使我们在分子水平上对木本植物耐盐机理有了进一步的认识。同时，丰富了林木基因工程育种理论，为抗逆基因工程育种提供一些优良的抗性基因。