背景与目的肾细胞癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一。在我国,肾癌占全部恶性肿瘤的2~3%,是泌尿系统发病率仅次于膀胱癌的恶性肿瘤,且近年来随着物质生活水平的提升及生活环境的恶化,其发病率呈逐年上升的趋势。肾癌是一种具有多药物耐药基因的泌尿系恶性肿瘤,对传统的放、化疗不敏感。目前针对肾癌的治疗多采用综合治疗的手段,包括了手术治疗、免疫治疗、生物治疗及靶向药物治疗等方法,特别是对无手术机会的晚期肾癌,免疫治疗和生物治疗等综合治疗手段应用更为广泛。干扰素是一种具有多种生物活性的小分子蛋白,最初发现它能抑制活病毒增殖,后续研究逐渐揭示其具有调节细胞增殖反应、参与机体免疫系统调节、增强NK细胞活性、抑制肿瘤血管生成、诱导肿瘤细胞凋亡及直接杀伤肿瘤细胞等功能,为肿瘤的综合治疗提供了新的思考方向。环氧化酶-2(COX-2)首先因长期服用其特异性抑制剂能降低结肠癌的发生率而受到关注。相关研究表明,COX-2在多种恶性肿瘤组织中呈高表达状态,促进肿瘤新生血管生成,与肿瘤的增殖、侵袭和转移关系密切,其表达量与肿瘤的恶性程度呈正相关。已有大量研究表明COX-2的特异性抑制剂通过促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管形成等方式对肿瘤的发生发展起到了抑制作用,改善了病患的预后。故本实验拟采用干扰素联合COX-2特异性抑制剂作用于肾癌细胞及其裸鼠移植瘤,观察联合用药的抑制效果及探讨其相关作用机制。方法1、采用CCK-8检测不同浓度梯度的IFNα-1b和NS398单独及联合与肾癌(ACHN)细胞培养时对该细胞增殖的影响。2、采用蛋白免疫印迹法检测与IFNα-1b和不同浓度梯度的NS398单独及联合培养后的肾癌细胞中抗凋亡蛋白Bcl-xl和环氧化酶-2的表达水平的变化。3、采用ACHN细胞建立裸鼠移植瘤模型,成瘤后随机分组为阴性对照组、IFNα-1b组、NS398组及IFNα-1b+NS398联合用药组,给予各组小鼠相应药物治疗。定期测量并记录用药后裸鼠抑制瘤的大小。4、剥除治疗结束后裸鼠的移植瘤,采用免疫组化的方法检测各组小鼠移植瘤中血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的差异。结果1、CCK8结果表明,不同浓度梯度的IFNα-1b和NS398单独与ACHN细胞混合培养,肿瘤细胞受抑制的程度随药物浓度的增大而增强;联合用药对ACHN细胞的抑制作用优于单独培养,且抑制作用随用药剂量的增大而增强。2、蛋白免疫印迹实验结果表明,IFNα-1b和NS398与ACHN细胞单独及联合培养后,Bcl-xl和COX-2在该细胞的表达均受到较为明显的抑制,且单独及联合用药时的受抑制程度随药物浓度的增大而增大。3、裸鼠移植瘤的生长曲线结果显示,随着用药时间的延长,IFNα-1b组、NS398组及联合用药组裸鼠肿瘤体积均较阴性对照组小,其中联合用药组裸鼠的肿瘤体积最小。4、移植瘤的免疫组化结果显示,IFNα-1b组与NS398组及联合给药组的VEGF表达与对照组相比较受到不同程度的抑制,联合给药组对肿瘤组织中VEGF的表达抑制效果最佳。结论1、IFNα-1b和NS398能有效抑制肾癌细胞的增殖、诱导肿瘤细胞凋亡,联合用药有协同抑制作用;2、IFNα-1b和NS398能有效抑制肾癌组织中环氧化酶-2的表达,联合用药效果更佳,环氧化酶-2可作为肾癌非手术治疗的新靶点;3、IFNα-1b和NS398可能通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新生血管生成等途径发挥抗肿瘤作用。