论文部分内容阅读
目的:通过建立犬全层皮肤烧烫伤模型,探讨骨髓间充质干细胞分泌因子治疗犬全层皮肤烧伤的疗效,为其进一步的临床应用提供依据。方法:1.试验选用12只健康中华田园犬,随机分成3个组,每组4只。A组:试验犬使用固体汽油烧伤;B组:试验犬95℃水烫伤;C组:试验犬纸片浸酒精烧伤。造模后记录死亡数、观察试验犬烧伤部位的外观表现,并对烧伤后的全层皮肤取样,制作病理切片。根据造模后三组的死亡率、外观表现、切痂后皮下表现和病理组织学观察,对比统计三种烧伤造模方法在犬全层皮肤烧烫伤造模中的优劣。确定最适合犬全层皮肤烧伤的造模方法。2.试验选用24只造模犬,随机分为3个组(n=8),分别为单纯造模组(A组):造模后使用生理盐水治疗;磺胺嘧啶银治疗组(B组):造模后使用磺胺嘧啶银软膏涂抹治疗;骨髓间充质干细胞分泌因子治疗组(C组):造模后使用骨髓间充质干细胞分泌因子治疗;各试验组于治疗后每天对烧伤情况进行观察记录临床情况;另选8只非造模健康犬做空白对照组(D组)。四组于治疗后0、1、2、5、7、14、21天,使用ELISA试剂盒测定C-反应蛋白、肿瘤坏死因子-α含量;治疗后第0、7、14、21天测量愈合面积以及病理组织HE、Masson染色镜检观察。得到数据用SPSS22.0版本软件进行统计分析。结果:1.造模期间A组死亡率25%、B组死亡率0%、C组死亡率0%。表观指标:造模后观察A组和C组造模部位的皮肤受热面积不均匀,轻度表现红肿并有黄白色浆液渗出(Ⅰ度烧伤),较严重部位为出现点状灰黄色坏死灶(深Ⅱ度烧伤)。严重部分为黑色干痂(Ⅲ度烧伤)。B组受热程度均一,随造模时间延长烧伤程度加深,5秒与10秒时皮肤轻度表现为微黄至深黄色皮肤红肿,弹性减弱皮肤损伤(浅Ⅱ度烧伤)。15秒与20秒时皮肤弹性完全消失,烧伤部位病变表现为一致的干性坏死,皮肤面积显著缩小,外有结痂覆盖(深Ⅱ度烧伤)。病理指标:A组和C组烧伤造模后显微镜观察发现两组病理表现接近,5s、10s时同一处取样皮肤观察到部分皮肤表皮细胞排列不整、其余部分表现为皮肤各层结构变性坏死。15s和20s,皮肤结构观察表皮层全层坏死缺损、真皮层细胞变性、毛囊皮脂腺消失,少部分皮肤表现真皮胶原纤维排列紊乱、空泡大量形成部分附属结构结构不清。B组烫伤5秒后可见表皮全层凝固坏死或表皮层脱落,真皮层水肿,10秒后皮肤表皮真皮结构不清,15秒和20秒造模后全层皮肤结构模糊(全层烧伤)。切痂时皮下表现:A组、C组在10秒、15秒、20秒造模后切除烧伤皮肤时发现造模皮肤处肌肉红肿、出血;B组20秒时出现肌肉受损。综上得出:A组与C组时受热面积无法控制,导致造模后皮肤烧伤面积不固定,烧伤程度不均一,B组无此反应。制作犬全层皮肤烧伤模型,95℃水15秒烫伤造模效果最佳。2.在治疗期间A组死亡率为37.5%,B组死亡率12.5%,C组无死亡,D无死亡;创面外观变化:治疗后7天,单纯造模组(A组)严重的化脓。磺胺嘧啶银治疗组(B组)创面红肿,黄色渗出物凝结为痂皮。骨髓间充质干细胞分泌因子治疗组(C组)残留面积缩小,可见有肉芽组织填充创缘。治疗14天时,A组创口皱缩较严重。B组创面干燥,开始部分脱痂。C组创面脱痂后,创面愈合完整,愈后皮肤组织红白相间。治疗21d后,A组创面未完成上皮化。B组创口愈合率91%,C组创口愈合率100%;A组愈合期(34.7000±6.53241)d、B组为(29.2000±1.92304)d、C组为[(19.7300±2.23402)]d,C组愈合期显著低于A、B组(P<0.01)。治疗第2天开始C组TNF-α含量持续下降,第5天C组TNF-α含量显著低于A组、B组(P<0.01),第14天,C组TNF-α含量接近空白对照组(D组)。三组试验犬治疗第1天开始测定C-反应蛋白(CRP),三组CRP水平无差异,在治疗期第2天A、B、C组CRP水平开始下降,C组与A、B组之间相比差异极显著(p<0.01)。第7天C组CRP水平接近D组;病理组织HE、Masson染色观察,7d镜检C组毛细血管丰富,大量胶原纤维向创口靠近,创面由上到下有分层趋势。B组毛细血管较少,炎性细胞浸润明显,少量成纤维细胞增生。A组组织坏死严重,皮肤分层不明显且没有上皮化趋势。14d后C组创口收敛完整且出现上皮化,内有幼稚分泌腺组织出现。B组创面组织出现上皮化,血管分布不广泛。A组成纤维细胞大量出现,创面修复出现上皮化。治疗21d后,A组为瘢痕修复。B组创面生长情况较差,皮肤附属器不发达。C组创口已全部愈合,表皮、真皮以及附属器趋于正常皮肤。结论:1.应用95℃水15s烫伤能成功建立犬全层皮肤烧伤模型。2.骨髓间充质干细胞分泌因子治疗犬全层皮肤烧伤,优于磺胺嘧啶银治疗组。