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目的:探索miR-9-5p靶向BRAF调控脉络膜黑色素瘤细胞功能的机制。方法:1、miR-9-5p对脉络膜黑色素瘤细胞功能的影响体外培养人眼侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2B和MUM-2C,通过阳离子脂质体介导的方法,瞬时转染miR-9-5p的模拟序列(mimics)、抑制序列(inhibitor)及各自的对照序列(NC和inhibitor NC),利用RT-qPCR检测miR-9-5p表达变化;采用EDU实验观察细胞的增殖变化;采用Transwell实验检测细胞迁移侵袭数量变化。2、miR-9-5p靶向结合BRAF并抑制BRAF的表达利用生物信息学网站TargetscanHuman7.2和microRNA.org分析预测miR-9-5p与BRAF mRNA 3’UTR区域的结合序列;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-9-5p与BRAF mRNA 3’UTR区域的结合情况;利用RT-qPCR检测BRAF mRNA的表达变化;利用Western Blotting检测BRAF蛋白表达情况。3、BRAF对野生型脉络膜黑色素瘤细胞功能的影响利用基因干扰技术,对脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2B和MUM-2C转染si RNAs,采用Western Blotting检测BRAF蛋白表达变化;利用EDU实验检测细胞增殖数量变化;利用Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭数量变化。4、miR-9-5p靶向BRAF对脉络膜黑色素瘤细胞功能的调控构建BRAF过表达稳转细胞系,采用Western Blotting检测BRAF蛋白表达,同时转染miR-9-5p mimics,检测BRAF蛋白表达变化;采用EDU实验检测细胞增殖变化;采用Transwell实验检测细胞迁移数量变化。结果:1、RT-qPCR结果表明转染miR-9-5p mimics后,miR-9-5p表达显著上调,而转染miR-9-5p inhibitor后,miR-9-5p表达显著下调;EDU表明转染miR-9-5p mimics后,细胞的增殖数量明显减少,而转染miR-9-5p inhibitor后,细胞的增殖数量明显增加;Transwell实验显示转染miR-9-5p mimics后,细胞的迁移和侵袭数量显著减少,而转染miR-9-5p inhibitor后,细胞的迁移和侵袭数量明显增多。2、Targetscan Human7.2和microRNA.org分析预测得出miR-9-5p与BRAF mRNA 3’UTR区域的结合序列;双荧光素酶报告基因实验验证miR-9-5p与BRAF mRNA 3’UTR区域存在互补结合。RT-qPCR结果表明转染miR-9-5p mimics后,BRAF mRNA的表达显著下调,而转染miR-9-5p inhibitor后,BRAF mRNA的表达显著上调;Western Blotting结果显示转染miR-9-5p mimics后,BRAF蛋白表达显著下调,而转染miR-9-5p inhibitor后,BRAF蛋白表达显著上调;3、Western Blotting实验结果表明,siRNAs使脉络膜黑色素瘤细胞中BRAF蛋白表达显著下调;EDU实验结果表明沉默BRAF,细胞的增殖数量显著减少;Transwell实验结果表明沉默BRAF,细胞的迁移和侵袭数量显著减少。4、过表达BRAF稳转细胞系中BRAF蛋白表达显著升高,同时给予细胞转染miR-9-5p mimics能够使BRAF蛋白表达回降;体外细胞功能实验结果表明过表达BRAF稳转细胞增殖、迁移数量显著增加,同时给予细胞转染miR-9-5p mimics能够使细胞的增殖、迁移数量减少。结论:1、miR-9-5p抑制脉络膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。2、BRAF促进野生型脉络膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。3、miR-9-5p靶向BRAF负向调控BRAF的表达及脉络膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。