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蛇毒神经毒素,具有很高的生物活性和良好的中枢作用,是研究神经系统中神经递质的产生及其传递过程分子机制的重要探针,但是神经毒素是中药大分子,无法透过血脑屏障,无法通过外周给药达到预期的效果。因此无创伤性改变中枢作用药物的透过性具有重要的临床价值和现实意义。广东地处华南,具丰富的蛇类资源,其蛇毒的产量高。蛇毒镇痛多肽的研究将为镇痛药物开辟新资源,促进广东中医药事业的发展。本实验以中华眼镜蛇粗毒为原料,分离纯化获得神经毒素,探讨在中药光敏剂脱镁叶绿酸a的介导下血脑屏障开放促进药物的吸收作用,以促进神经毒素进入中枢,研究其透过和分布规律,并探讨其镇痛作用机理。主要方法和结果如下:(1)采用丙酮法从中药蚕砂中提取脱镁叶绿酸a,此法操作简单,成本低,提取率高,产物纯度高。提取工艺为:通过丙酮浸提,浓缩后经乙醚转溶,再用30%盐酸使叶绿素脱镁并盐酸化而分离,调节pH至2.5~3.0可使脱镁叶绿酸a沉淀而出。提取率为0.66%,纯度为97.9%。(2)采用CM-Agrose离子交换色谱和Sephadex G-50、 Sephadex G-25凝胶过滤色谱对中华眼镜蛇毒进行分离纯化,收集色谱峰,冷冻干燥。通过毒性试验确定纯化产物为神经毒素(CNT),提取率为3.51%。采用SDS-PAGE法测定纯化产物的分子质量为7989Da。用醋酸扭体法和热板法考察CNT的镇痛活性,结果表明CNT具有镇痛效果,CNT和脱镁叶绿酸a光照组具有更好的镇痛效果。(3)本实验通过使君子酸兴奋毒性损伤ESCI模型为中枢痛动物模型,通过脱镁叶绿酸a与CNT络合,腹腔注射,借助于脱镁叶绿酸a的光敏作用,在弱激光照射下,研究不同脑区的ROS的变化情况。结果表明神经毒素降低了大鼠大脑各组织ROS含量,光激发脱镁叶绿酸a促进了蛇毒神经毒素对大脑的作用效果。(4)本实验通过色谱法从中华眼镜蛇毒中分离纯化得到了神经毒素,具有显著镇痛作用;通过大鼠兴奋毒性脊髓损伤(ESCI)模型实验,证实了光激发脱镁叶绿酸a促进了神经毒素的脑透过性和对大脑中枢的镇痛作用;其镇痛机制与活性氧(ROS)有关。