【摘 要】
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稳定的组培再生体系是建立遗传转化体系的前提,已经建立的茶树组织培养体系还存在不稳定、重复性较差的问题,还不适合用于茶树遗传转化。因此建立一个高效稳定的茶树再生体系对茶树基因工程的发展尤其重要。茶树茎段的器官发生能力较强,它对培养基和生长调节剂的要求较其它外植体简单,是研究外植体再生的良好材料。茎段快繁是建立无菌再生体系,保证大量的统一的外植体的基础,节间茎段作为外植体诱导效果较为理想。本研究以‘中
【基金项目】
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贵州省茶产业技术创新中心（黔科中引地[2017]4005）
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稳定的组培再生体系是建立遗传转化体系的前提,已经建立的茶树组织培养体系还存在不稳定、重复性较差的问题,还不适合用于茶树遗传转化。因此建立一个高效稳定的茶树再生体系对茶树基因工程的发展尤其重要。茶树茎段的器官发生能力较强,它对培养基和生长调节剂的要求较其它外植体简单,是研究外植体再生的良好材料。茎段快繁是建立无菌再生体系,保证大量的统一的外植体的基础,节间茎段作为外植体诱导效果较为理想。本研究以‘中黄1号’茶树节间茎段为外植体,对培养基及植物生长调节剂等一系列影响诱导分化的因素进行研究,优化了茶树组织培养的各种条件,建立一套完整的茶树茎段组织培养再生体系,为茶树良种繁殖和遗传转化的研究奠定了一定的基础。主要研究结果如下。1.‘中黄1号’茶树带腋芽茎段无菌体系的建立。以‘中黄1号’茶树带腋芽茎段为外植体,探索外植体的消毒组合、取材时间、带腋芽茎段形态、培养条件对建立无菌体系的影响。结果表明,以4月生长的‘中黄1号’茶树的幼嫩茎段新梢为外植体,以75%酒精浸泡1 min,无菌水清洗3-4次,再0.1%升汞浸泡12 min,无菌水清洗4-5次的消毒方式,并取节间较短的茎段,暗培养7d后转为正常光照培养为最佳培养组合从而获得无菌苗,最低污染率为11.2%,最高成活率为79.2%。2.茶树茎段组培再生体系的建立。以‘中黄1号’茶树组培苗节间茎段为外植体,结果表明:长度为1 cm的节间茎段接种于MS+70 mg/L硫酸腺嘌呤+3mg/L6-BA+0.2 mg/LTDZ培养基组合,并在光照条件下进行培养,为茶树茎段愈伤组织诱导的最佳组合,最高出愈率为97.8%,最高出芽率为72.3%;愈伤组织接种于MS+1 mg/L6-BA+1 mg/LTDZ+0.2 mg/LIBA培养基组合,并在光照条件下进行培养,为茶树茎段愈伤组织诱导不定芽的最佳组合,最高平均分化芽数为4.3;再生芽接种于MS+0.2 mg/L6-BA+2 mg/LNAA,能有效促进再生芽的生长发育,植株粗壮,长势好;茶苗接种于MS+0.7 mg/L6-BA+0.2 mg/LNAA+1mg/LIBA,能有效促进壮苗培养,最高平均株高为4.1 cm;茶苗使用200 mg/LIBA溶液浸泡底部切口处10 min后,接种于1/2MS+2 mg/LIBA+0.5 mg/LNAA,接种后暗培养7 d,能有效促进生根,生根率最高为63.3%,平均生根数最高为4.7;茶苗经过3 d的室外炼苗,再移栽至V营养土:V蛭石:V珍珠岩=2:1:1比例的土壤基质中,最高成活率为68.7%。
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