第一部分不同浓度胎牛血清对螺旋神经元体外培养的影响　　 [目的]研究不同浓度胎牛血清对体外分离培养螺旋神经元(SGNs)的相对存活率及突起生长长度的影响,寻找螺旋神经元更适合的培养环境。　　 [方法]选用出生1-3天的新生Sprague-Dawley大鼠30只,取蜗轴螺旋管,用0.125％胰蛋白酶进行消化分离,制成单细胞悬液,分为6组,分别采用含不同体积浓度胎牛血清(0％,0.5％,1％,2％,5％,10％)的DMEM/F12(添加B27、N2)培养液进行的培养。倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,在培养第3天及第5天固定细胞,用抗βⅢTublin单克隆抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定SGNs,抗GFAP单克隆抗体鉴定雪旺细胞,DAPI复染确认细胞核。在荧光显微镜下观察、拍照,以无血清培养组作为对照组,计算SGNs相对存活率及测量突起生长长度。　　 [结果]各个血清浓度组的螺旋神经元在培养10天后仍能存活;在培养7天时不同神经元突起之间形成联系,难以区分其末端。在培养3天及5天时,SGNs的相对存活率随着血清浓度增加而升高,呈剂量依赖关系。在较低血清浓度组(0.5％,1％,2％),突起再生长度较对照组长,但在5％及10％FBS组别中,再生突起明显短于对照组,并出现突起分支增多的现象。　　 [结论]螺旋神经元的原代分离培养中,在培养3天及5天时,胎牛血清能促进SGNs的存活,但过高浓度的血清减少了神经突起再生的平均长度,促进突起分支生长,在无血清或低血清浓度的培养环境中能获得较长突起。　　 第二部分抑制非神经元细胞后胎牛血清　　 对螺旋神经元体外培养的影响　　 [目的]观察低工作浓度的阿糖胞苷抑制非神经元细胞后,不同胎牛血清浓度对螺旋神经元生长存活率及突起长度的影响。　　 [方法]选用出生1-3天的新生Sprague-Dawley大鼠30只,取蜗轴螺旋管,用0.125％胰蛋白酶进行消化分离,制成单细胞悬液,用含10％FBS的DMEM/F12培养液在37℃、5％CO2环境中进行24小时的培养刺激细胞有丝分裂,去除培养液,在6个不同血清体积浓度(096,0.5％,1％,2％,5％,10％)的培养液中添加最终工作浓度为5μmol/L的阿糖胞苷(Cytarabine,Ara-C),培养48小时。漂洗去Ara-C后再继续培养;同时设立平行的不添加阿糖胞苷的各血清浓度对照组。倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。在总共培养3天及5天时固定细胞,用βⅢTublin单克隆抗体进行细胞免疫荧光染色,鉴定SGNs;抗GFAP单克隆抗体鉴定雪旺细胞;DAPI复染确认细胞核。在荧光显微镜下观察、拍照,以平行的无血清培养组作为对照组,计算SGNs相对存活率,测量突起再生长度;计算所有存活细胞相对密度。　　 [结果]5μmol/L的Ara-C能明显抑制细胞的增殖,大量成纤维细胞被去除。各组SGNs在这一作用环境中存活,神经突起有再生。相对于Ara-C未作用组,单位视野存活细胞数明显减少;在培养3天时,随着血清浓度增加,SGNs的相对存活率增加;培养5天时,各个血清浓度组之间SGNs的相对存活率无明显差异。培养3天及5天时,相对于未使用阿糖胞苷的各个血清浓度组,SGNs的相对存活率及神经突起长度均有轻度下降。　　 [结论]使用5μmol/L的阿糖胞苷,明显去除非神经元细胞、减少细胞密度后,培养3天时胎牛血清仍能促进螺旋神经元的存活,但5天时无明显差异,高浓度的血清抑制了神经突起的生长,并促进分支形成。阿糖胞苷本身轻度抑制了神经突起生长,并可能影响SGNs的存活。