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蟾酥是我国的传统中药,其发挥抗肿瘤作用的主要活性成分是蟾毒配基类化合物。本文对蟾酥药材中蟾毒灵、华蟾毒精和脂蟾毒配基进行分离,并将其制备为脂质体和纳米结构脂质载体两种制剂,主要解决蟾酥静脉注射后的血管刺激性、半衰期短、体内分布广泛等难题,充分发挥药物的抗肿瘤活性,降低其心脏毒性等毒副作用。本文首先建立了药材、提取物以及最终分离物的薄层色谱和高效液相的定性定量质量控制方法。以三种蟾毒配基的总含量和转移率为指标,对药材进行80%乙醇回流提取,乙酸乙酯萃取和硅胶柱层析分离,最终分离物中三种蟾毒配基的总含量在95%以上,总转移率大于70%。处方前研究表明,三种蟾毒配基在水中的溶解度较低,其溶解度及在正辛醇／水系统中的分配系数均具有非pH依赖性,Log P值均在3左右。稳定性实验表明,蟾毒配基分离物在露置空气、高温、高湿和强光照射下稳定性良好,其水溶液在pH大于8或小于4的环境中均不稳定,在pH6.0-7.0之间较稳定。酶解实验中,蟾毒灵与脂蟾毒配基较稳定,华蟾毒精在血浆中的稳定性较差,其降解符合伪一级反应动力学。以脂质体的外观、粒径、包封率为评价指标,对蟾毒配基脂质体(BU-lipo)的制备过程进行了研究。确定处方为：磷脂用量为1.25%,药脂比为1：20,胆固醇与磷脂比为1：20,α-生育酚用量为磷脂的1%。冷冻干燥过程中使用10%海藻糖为冻干保护剂,工艺为：-75℃预冻12 h,冻干机程序升温过程为-35℃保持1h后升温至-25℃维持12 h,然后升温至20℃干燥4 h。BU-lipo多为单室脂质体,粒度为96.5±50.6 nm,zeta电位为-8～-4 mV,pH值在6.5左右,三种蟾毒配基的包封率分别为86.5%,90.0%和92.1%。体外释放符合Weibull模型,BU-lipo中华蟾毒精在血浆中的稳定性与游离药物相比有显著提高。此外建立了微渗析法测定微粒制剂的包封率,该法准确度高,重现性好。采用单硬脂酸甘油酯、中链脂肪酸甘油酯和油酸为脂质材料,以Lipoid E80(?)、PluronicF68及脱氧胆酸钠为乳化剂,使用高速搅拌超声法制备蟾毒配基纳米结构脂质载体(BU-NLC)。制剂粒径为104.1±51.2 nm,zeta电位为-15～-20 mV,pH值在6.8～7.2之间,三种蟾毒配基在制剂中的包封率均大于85%。采用透射电镜及冷冻蚀刻电镜观察BU-NLC粒子形态为较圆整的球形,DSC和X-射线衍射结果显示冷冻干燥后BU-NLC以无定形状态存在于冻干保护剂中。体外释放符合Weibull释放模型,72 h后药物的释放进入平台期,BU-NLC可较好的控制药物的体外释放。体外血浆稳定性实验表明,当血浆浓度为80%时,BU-NLC中华蟾毒精的降解半衰期为9.34 h,是BU-lipo和溶液剂中华蟾毒精降解半衰期的1.72和17倍。冷冻干燥工艺研究表明脂质浓度和冻干保护剂种类对冻干样品有较大的影响。当脂质浓度为0.3%含10%蔗糖为冻干保护剂时,BU-NLC粒子在冷冻干燥过程中可被完好保护。建立了同时测定生物样品中三种蟾毒配基的UPLC-MS／MS法,该法专属性强,灵敏度高,分析时间短。大鼠药代动力学实验表明：BU-NLC在0.25～1.0 mg／kg剂量范围内的体内代谢符合线性动力学特征；给予相同剂量(1.0 mg／kg)BU-NLC和BU-S后,BU-NLC可使药物在体内保持较高的血药浓度,蟾毒灵、华蟾毒精、脂蟾毒配基的AUC0-t分别是BU-S组的1.87,1.96和2.84倍,Cmax也有显著提高(P<0.05)。BU-NLC组表观分布容积和清除率也比BU-S组的小。组织分布实验表明：正常小鼠静脉注射相同剂量(1.5 mg／kg)BU-NLC和BU-S后,BU-NLC可使蟾毒配基在脑、脾、肝中的浓度增加,而心组织中药物的分布有所下降；荷瘤小鼠多次或单次静脉注射相同剂量(1.0 mg／kg)BU-NLC和BU-S后,与正常小鼠相比各组织中药物的相对分布量没有明显差异。三种蟾毒配基在瘤组织中均有一定的分布,依次为R>C>B,BU-NLC可提高蟾毒配基在瘤、脑、脾和肝中的浓度,减少其在心中的分布,但是由于荷瘤动物数据点较少,不具有统计学显著差异。此外值得注意的是与大多数药物不同,给予两种制剂后,三种蟾毒配基分布较多的脏器依次是肺,脑,脾,肾,心和肝,其在肝组织中的浓度均最低,在脑中的分布相对较多,同时脑组织内药物代谢相对较慢。以人胃癌HGC-27细胞和人胶质瘤U87-MG细胞为细胞模型,采用MTT法对蟾毒配基游离药物及BU-NLC的体外抗肿瘤活性进行评价。结果表明BU-NLC对两种细胞系的抑制作用与游离药物相似,表现出了明显的时间和浓度依赖性。体内抗肿瘤实验采用S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤动物模型,蟾毒配基溶液剂组(1.0 mg／kg／d)的抑瘤率为36.79%,BU-NLC高(1.0 mg／kg／d)、中(0.5 mg／kg／d)、低剂量(0.25 mg／kg／d)组均能有效抑制体内S180小鼠肿瘤细胞的生长,并且随着剂量的增加,抑制作用增强,最高抑制率可达67%左右,同时没有阳性药环磷酰胺降低脾脏指数、胸腺指数的副作用。急性毒性实验表明,BU-NLC的LDso值为2.95 mg／kg,是蟾毒配基溶液剂LDso的1.28倍。安全性实验结果表明,当脂质浓度低于1.2 mg／mL时,BU-NLC体外不引起溶血。本文研究显示BU-NLC可改善蟾毒配基的体内行为和抗肿瘤疗效。其性质稳定,安全有效,适于静脉给药,希望能为蟾酥用于临床提供剂型、药效、毒理方面的科学依据。