【摘 要】
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目的钙是人体中含量最丰富的矿物质和金属元素,是构成人体骨骼和牙齿的主要成分,并具有参与血液凝固、维持神经肌肉正常活动、调节酶活性和促进新陈代谢等生理功能。成年人体内含钙量为1000～1200 g,占体重的1.5%～2.0%,其中99%以羟基磷灰石（Hydroxyapatite,HAP）的形式存在。维生素D3（Vitamin D3,VD3）是含钙物质用于补钙的黄金搭档,能够提高机体对钙、磷的吸收,促
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目的钙是人体中含量最丰富的矿物质和金属元素,是构成人体骨骼和牙齿的主要成分,并具有参与血液凝固、维持神经肌肉正常活动、调节酶活性和促进新陈代谢等生理功能。成年人体内含钙量为1000～1200 g,占体重的1.5%～2.0%,其中99%以羟基磷灰石（Hydroxyapatite,HAP）的形式存在。维生素D3（Vitamin D3,VD3）是含钙物质用于补钙的黄金搭档,能够提高机体对钙、磷的吸收,促进生长和骨骼钙化,促进小肠对钙和磷的吸收,并可诱导钙结合蛋白的合成。本文建立了钙和VD3含量的测定方法;设计复乳微反应法制备HAP/VD3囊心物,结合单凝聚法制备复合微囊,对复合微囊的相关性质进行考察;并构建缺钙小鼠模型,以碱性磷酸酶（ALP）、骨密度（BMD）、股骨低密度区面积、骨小梁排列紧密情况等为考察指标,对HAP/VD3复合微囊的补钙效果进行评价。方法建立UV-Vis分光光度法测量复合微囊中钙的含量;高效液相色谱法（HPLC）测量复合微囊中VD3的含量;原子吸收分光光度法（AAS）测量骨钙的含量。采用复乳微反应法以Na2HPO4和CaCl2溶液为内、外水相,VD3的环己烷溶液为油相,经二步乳化形成W/O/W型复乳,以复乳体系为微反应器,内外水相发生反应生成HAP,并吸附VD3,经海藻酸钙包裹,制得HAP/VD3复合微囊,并对HAP/VD3囊心物与复合微囊的性质进行了考察。构建缺钙小鼠模型,经灌胃给药后,采用骨密度分析仪测定BMD,血钙试剂盒检测血钙浓度,碱性磷酸酶试剂盒检测ALP浓度,HE染色实验,观察小鼠股骨骨髓腔内的变化情况,以及缺钙小鼠体重变化、活动情况和股骨直径、湿重等指标,综合考察HAP/VD3复合微囊补钙的效果。结果采用复乳微反应法制备了HAP/VD3复合微囊,乳化剂为吐温80,占初乳体积比为20%。所制备的囊心物中HAP为多孔晶体结构,VD3为无定型结构。复合微囊为球形囊状物,粒径约1.11μm。用UV-Vis法测量复合微囊中钙含量为36.81%,用HPLC测量复合微囊中VD3含量为百万分之2.9。与模型组比较,HAP/VD3复合微囊能够升高血钙含量（1.04→1.57μmol/d L）、骨钙含量（140.55→169.90 mg/g）、BMC（0.016→0.031 mg）及BMD（0.068→0.092 g/cm~3）水平,减少股骨低密度区面积,能在一定程度上促进股骨的增长,复合微囊组效果与碳酸钙组接近;HE图中可知,给药组骨小梁明显增多,排列紧密,骨髓腔明显减少,HAP/VD3复合微囊具有显著补钙疗效。结论所建立的复合微囊中钙和VD3含量以及骨钙含量的分析方法可以准确测量。所设计的复乳微反应法可用于HAP/VD3复合微囊的制备,粒径分布均匀,VD3以无定形态吸附在HAP孔隙中,可以解决HAP与VD3因处方量、溶解性差异较大所导致药物相容性差等问题。HAP/VD3复合微囊能够显著降低缺钙小鼠血清中ALP水平、增加BMD、减少股骨低密度区面积等,表现出良好的补钙效能。HAP/VD3复合微囊有望提高钙剂的吸收和利用,开发为新型补钙制剂用于补钙。
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