百脉根AP2/ERF类转录因子ERN1在侵染和结瘤过程中的作用机制研究

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:raul2008
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豆科植物可以通过与根瘤菌共生固氮的方式来获得氮素,在共生固氮过程中,根瘤菌主要通过植物根毛形成的侵染线进入植物细胞并向下延伸,与此同时植物皮层细胞分化形成根瘤原基,根瘤菌从侵染线中释放出来,形成共生体并在根瘤中发挥固氮功能。为了研究在豆科植物的侵染和结瘤过程中有重要作用的基因,本实验以百脉根为模式生物,通过正向遗传学手段筛选到EMS诱变突变体SL1913-7,该突变体表现出不能被根瘤菌侵染和结瘤异常的表型。结合图位克隆和测序实验发现SL1913-7在一含有APETALA2/Ethylene Responsive Factor(AP2/ERF)结构域的转录因子中发生突变。同源比对发现该基因与苜蓿中的MtERN1有76%的同源性,因此命名为LjERN1。获得了LjERN1的LORE1(Lotus retrotransposon1)逆转录转座子插入突变体后,等位实验验证了SL1913-7和LjERN1的LORE1插入突变体的突变表型确实是同一个基因的突变引起的,互补实验表明,过表达LjERN1能够恢复LjERN1的LORE1插入突变体的表型。因此,将SL1913-7命名为ern1-1,将LjERN1的LORE1插入突变体命名为ern1-2。与ern1-1的表型相似,ern1-2突变体在侵染早期也不能形成侵染线,侵染后期只能形成少量的粉瘤。超薄切片并TEM电镜观察发现,LjERN1突变体的共生体具有多层完整细胞壁,这暗示着LjERN1的突变可能影响了共生体形成过程中细胞壁的降解过程。通过EMSA以及转录激活实验发现,LjERN1能够被转录因子CYCLOPS直接调控。通过RNA-seq寻找LjERN1的下游调控基因,并通过在野生型和ern1-2背景下的基因表达量分析、启动子转录激活实验验证了早期结瘤响应基因NIP-1、NIP-2和ENOD16的转录受到LjERN1的激活。另外,酵母双杂实验表明LjERN1能够与nuclear factor类转录因子NF-YA1和NF-YC1进行蛋白相互作用。本实验为进一步揭示LjERN1在共生固氮中的作用机理提供了线索。
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