前言 卵巢恶性肿瘤发病率占妇科恶性肿瘤第三位，由于其起病隐匿，无典型症状，缺乏敏感而特异的早期诊断方法，晚期病例治疗收效较少，因此它始终为妇科恶性肿瘤的首位死亡原因。 目前卵巢癌的治疗是以手术为基础，结合化疗、放疗等的综合治疗，但疗效甚差。因此迫切需要寻找新的辅助疗法配合手术和化疗，以减少或延缓复发和提高生存率。随着分子生物学、免疫学和肿瘤学的发展，卵巢癌的生物学治疗已逐渐成为现实。 卵巢癌生物学治疗中的重要组成部分是免疫治疗，其中细胞因子治疗的研究又是一个热点，主要包括干扰素-γ（IFN-γ）或白细胞介素-2（IL-2）疗法，并取得了一定成效。近年来人白细胞介素7（IL-7）的抗肿瘤作用也很受关注。IL-7是一种主要由骨髓基质细胞产生的细胞因子，它除刺激B细胞前体细胞成熟外，还可刺激成熟的T细胞增殖，增强T细胞的作用和淋巴因子的反应性。IL-7转基因瘤苗治疗又是IL-7抗肿瘤研究的热点之一，转基因治疗可避免细胞因子体内用药生物半衰期极短，需要连续、大剂量用药而使机体难以耐受毒副作用的缺点。目前尚未见体外直接应用IL-7抑制肿瘤细胞增殖的实验报道，但IL-7体内应用则 2001浙江大学硕士学位论文有一定的抗肿瘤活性。研究表明，IL－7基因整合至肿瘤细胞后，肿瘤细胞的兔疫原性增强；以小鼠为模型的动物实验也表明，IL－7基因修饰瘤苗能诱导机体的抗肿瘤细胞兔疫，并能使瘤细胞成瘤性下降。 目前有关卵巢癌与兀－7相互关系的报道很少，根据本实验室以往研究结果，现初步可以认为；卵巢癌组织或细胞不分泌或低水平分泌IL。7。在治疗方面，迄今国内外尚没有卵巢癌的几－7转基因疗法的报道。因此，我们考虑是否能利用我们成功克隆转染并稳定表达几－7的SKOV3－IL－7来实现卵巢癌的体内儿－7基因疗法研究。 卵巢癌的研究必须找到一种合适的动物模型。严重联合兔疫缺陷鼠（severecombined immune deficiency mice，SCID mice）的出现，使人类恶性肿瘤的生物学研究又迈进了～大步。它的主要特点表现为T、B细胞功能严重缺陷，血清中检测不出免疫球蛋白的分泌，外周血淋巴细胞的数量较大程度减少。正因如此，SCID鼠就成为异种移植瘤的良好载体系统。随着不同种类的人肿瘤组织及细胞株培养细胞的相继移植成功，SCID鼠已成为荷人肿瘤的理想模型。之后，学者们又在探索如何模拟人体免疫情况下的荷瘤状态。1988年，Moiser首次建立了一个稳定的人化SCID鼠模型。Hll．SCID鼠是迄今最适于进行肿瘤免疫研究的模型，最接近于人体的实际情况，可替代人体进行基因治疗兔疫治疗的研究，在肿瘤治疗药物的筛选和治疗方法的选择方面起了很大的作用。 目前国外已成功建立SCID鼠卵巢癌腹腔移植模型，但国内将SCID鼠用于卵巢癌的研究还比较少，只有卵巢癌的皮下移植模型，这样就在一定程度上不能反映卵巢癌腹腔播散的生物学特性。 根据IL－7抗肿瘤功能及其与卵巢癌的关系和人化SCID鼠的生物学特性，本研究拟建立荷人卵巢癌 SKOV3人化 PBL SCID鼠腹腔移植模型，观察荷瘤鼠的生物学特性及其在细胞和蛋白水平观察荷瘤鼠在生物学、免疫学方面的改变，并在此基础上首次建立荷人转几－7基因卵巢癌SKOV3 SCID鼠和人化PBL SCID鼠腹腔移植模型，观察人几－7基因转染在荷卵巢癌鼠体内的作用。 －2－ 2001浙江大学硕士学位论文第一部分 荷人卵巢癌人化 PBL SCID鼠腹腔移植模型的建立 目的；建立荷人卵巢癌SKOV3人化SCID鼠腹腔移植模型，观察荷瘤鼠在生物学、兔疫学方面的特性，为卵巢癌的研究提供一种更能模拟人体兔疫环境的荷瘤动物模型。方法：实验组：SCID鼠腹腔内注射人 PBL 4X 10’个／只，24小时后腹腔内注射 SKOV3卵巢癌细胞 IXIO’个／只。对照组：腹腔内注射 SKOV3卵巢癌细胞 IXIO’个／只。共同饲养在SPF环境中，采用巨检、组织学、透射电镜等方法观察其生物学特性的变化，采用测定小鼠终末血IgG方法鉴定人化是否成功。所有数据用SPSS 10刀软件处理。结果：1．所有SCID鼠均有肿瘤形成，SKOV3组腹腔肿瘤出现以横腼、肠系膜。肝周。腹膜为主的广泛播散，有血性腹水，SKOV3人化组较SKOV3相比荷瘤状态有明显改善，肿瘤腹腔播散程度明显减轻，腹水消失。2．各组肿瘤组织经HE染色。细胞生长形态等观察，发现移植前后的肿瘤细胞极其相似，并得到组织病理学的证实。3．小鼠脾脏称重。肿瘤组织光学显微镜、透射电镜等检查提示荷瘤鼠人化前后有显著性差异。人化后荷瘤鼠脾重增加，肿瘤细胞内TIL明显增多，出现早期的细胞凋亡征象。4．人化后各组小鼠血浆人IgG水平随时间延长逐渐升高，但荷SKOV3人化组显著高于PBL组（＜0．05）。 第h部分 荷人卵巢癌 SKOV3－IL－7人化 PBL SCll）鼠腹腔移植模型的建立目的