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肝癌是最常见且发病率较高的恶性肿瘤之一,发现往往已属中晚期。肝癌患者的5年生存率小于20%,实现早期诊断是降低肝癌死亡率最有效的途径;传统的甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)检测和超声成像分析敏感性、特异性不足,难以实现早期诊断。核酸适配体是能够通过分子内折叠形成特定的三维结构从而与靶分子高特异性、高亲和力结合的单链DNA或RNA。核酸适配体与靶分子结合的灵敏度高、特异性强,在生物医学、新药研发、靶向治疗和疾病检测等方面具有巨大潜能和优越性。本文利用双向热循环消减SELEX技术,筛选肝癌血清和健康人血清特异性核酸适配体,为建立肝癌肿瘤血清检测新技术奠定了基础。同时,利用筛选出来的核酸适配体调取了肝癌病人血清特异性蛋白质,并对其进行了初步的分析。研究内容与结果如下。1、采用双向热循环消减SELEX技术分别以肝癌血清和健康人血清为目标靶,经过19轮双向热循环消减SELEX筛选,得到了肝癌病人血清特异性核酸适配体和健康人血清特异性核酸适配体序列各1000余条,分别挑取并合成了其中各4条高丰度核酸适配体序列,并对其进行了特异性检测。取肝癌病人和健康人血清各50例进行特异性检测,结果显示,肝癌血清核酸适配体检出率达到92%,健康人血清核酸适配体检出率达到94%。2、利用在线分析软件NUPACK对挑选出的核酸适配体进行了二级结构分析。结果显示,8条核酸适配体序列均富含G、C碱基,二级结构呈茎环结构。3、将筛选出获得的核酸适配体与链霉亲和素磁珠结合,制备了磁珠-适配体复合物。利用制备的磁珠-适配体复合物,从肝癌血清中调取了核酸适配体特异性结合蛋白,高通量测序,获得了可与核酸适配体特异性结合的一个蛋白组。4、通过KEGG等软件对获得的蛋白质组进行了生物信息学分析。其中,生长分化因子11(GDF11)与细胞因子-细胞因子受体之间的相互作用有关,血清血管生成素-2(Ang-2)与MAPK信号通路、Ras信号通路及Rap1信路等信号通路有关、甲胎蛋白AFP与TGF-β信号通路、Wnt信号通路、HIPPO信号通路有关、岩藻糖苷酶AFU与其他多糖降解以及溶酶体内的一些途径有关。