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目的:利用网络药理学的研究方法收集左金丸作用于结直肠癌的活性成分、功能靶点和预测和分析其作用机制。利用体外研究的方式,观察和检测左金丸与益生菌Ec N联用后对结肠癌细胞的影响及可能性的机制。方法:(1)通过网络药理学方法筛选左金丸中的活性成分,分析其治疗结直肠癌的功能靶点。通过基因功能注释分析工具构建左金丸活性成分-功能靶点-通路网络,并使用富集分析方法预测左金丸作用于结直肠癌的潜在靶点及通路,进行左金丸活性成分的初步筛选。(2)结合网络药理学方法与文献检索,将小檗碱、吴茱萸碱、槲皮素以及异鼠李素与小鼠结直肠癌CT26细胞进行共培养,使用MTS方法对各单体化合物进行初步评估。使用MTS方法评估小檗碱及吴茱萸碱分别与益生菌Ec N联合使用12h、24h、48h后对小鼠结直肠癌CT26细胞存活率的影响。使用与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测相关炎症因子IL-17、IL-22及IL-23的分泌;通过Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术及Hoechst33258染色实验观察左金丸中的活性成分小檗碱与吴茱萸碱分别及与益生菌Ec N联合使用对小鼠结直肠癌CT26细胞凋亡的影响,通过Hoechst33258切片脱蜡染色法检测左金丸中单独及与益生菌Ec N联合使用对小鼠的肠道肿瘤组织细胞凋亡的影响。使用Western blot法检测左金丸中的活性成分小檗碱与吴茱萸碱分别及与益生菌Ec N联合使用对小鼠结直肠癌CT26细胞、及肿瘤组织相关凋亡蛋白的影响。结果:(1)筛选获得左金丸中化合物234种和靶点蛋白482个;得到结直肠癌相关基因737个并转化为靶点蛋白;使用Venn分析方法得到左金丸与结直肠癌共同靶点蛋白50个,包括PIK3CA、AKT1、TP53、HIF-1α、Bax和MYC等;对50个共同靶点蛋白进行富集分析,得到基因GO本体条目283条,涉及核质、细胞凋亡、基因表达调控等方面,KEGG通路58条,主要涉及有癌症的途径、癌症中的蛋白多糖、结肠癌、膀胱癌、乙型肝炎,以及HIF-1信号通路、PI3K信号通路和FOXO信号通路等,提示左金丸治疗结直肠癌的作用机制可能与细胞凋亡及炎症调控相关;结合网络药理学方法与文献检索最终筛选左金丸的活性成分4种(小檗碱、吴茱萸碱、槲皮素、异鼠李素)进行后续实验研究。(2)MTS法评估4种活性成分对小鼠结直肠癌CT26细胞活力影响的初步筛选结果提示小檗碱、吴茱萸碱对CT26有明显的抑制作用,再次筛选后选用浓度吴茱萸碱3.5μmol/L、6.5μmol/L、13μmol/L,小檗碱6.5μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L进行后续Ec N联用实验。结果显示,小檗碱、吴茱萸碱与Ec N联用对小鼠结直肠癌CT26细胞炎症因子的分泌均没有明显影响(P>0.05);左金丸能够诱导小鼠的肠道组织细胞凋亡;左金丸中的活性成分吴茱萸碱+Ec N干预能够诱导小鼠结直肠癌CT26细胞凋亡(P<0.05);吴茱萸碱+Ec N与小檗碱+Ec N干预均能够升高小鼠结直肠癌CT26细胞的Cleaved-capase3/capase3及Bax/Bcl-2比率。结论左金丸与左金丸中的活性成分小檗碱、吴茱萸碱联合益生菌Ec N能够诱导小鼠结直肠癌CT26细胞凋亡进而改善结直肠癌;小檗碱、吴茱萸碱联合益生菌Ec N诱导小鼠结直肠癌CT26细胞凋亡的效果可能与其升高Cleavedcapase3/capase3及Bax/Bcl-2比率有关。该结果能够为中药联合益生菌抗肿瘤以及左金丸的开发利用提供依据。