论文部分内容阅读
背景基质细胞衍生因子(stromal cell derived-factor1,SDF-1)又名CXCL12或前B刺激因子,属于CXC族趋化因子成员,同基因编码两种蛋白:SDF-1α和SDF-1β。SDF-1主要在骨髓基质细胞及骨髓内皮细胞表达,在造血干细胞中也有相应的表达。SDF-1唯一的受体CXCR4是一个有七个跨膜结构域的G蛋白耦联的受体,在造血干/祖细胞表面及内皮祖细胞表面高表达,新近研究表明CXCR4也在骨髓间充质细胞(marrow stromal cells;MSC)上表达。文献报道,在心肌梗死后的心肌中立即出现了SDF-1的上调并导致过表达CXCR4的MSC向损伤心肌迁移。在Zhang等的研究中表明CXCR4+的MSC参与了新生血管的生成并分化为新的心肌细胞,动物实验表明SDF-1/CXCR4轴的相互作用在心肌修复时对MSC的募集起着重要作用,在SDF-1和/或CXCR4敲除老鼠的研究中表明该轴在细胞分化中起着重要作用。MSC是骨髓微环境中重要细胞成分,具有向各种细胞分化的潜能,且有文献报道MSC可向平滑肌祖细胞(Smooth muscle progenitor cell;SPC)分化。骨髓源性MSC或SPC是动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)斑块中平滑肌细胞重要来源之一。那么在As的斑块形成及修复过程中SDF-1/CXCR4轴是否能募集MSC或骨髓源性的SPC的归巢致损伤动脉,参与As形成尚未见报道。目的检测As危险因子氧化低密度脂蛋白(Oxidized Low Density Lipoprotein;ox-LDL)对小鼠骨髓源性SPC SDF-1受体CXCR4表达的影响,探讨SDF-1/CXCR4对骨髓源性SPC归巢至受损动脉的作用。方法小鼠骨髓源性SPC与ox-LDL(50μg/mL)共同孵育,用逆转录聚合酶链反应法(Reverse transcription-polymerase chian reaction;RT-PCR)检测SPC CXCR4 mRNA的表达,免疫印迹法(immunoblotting)及免疫荧光染色和共聚焦激光扫描显微镜分析(immunofluorescence staining and confocal laser scanning microscope analysis)检测SPC CXCR4蛋白表达,观察ox-LDL对SPC表达CXCR4的时效关系。结果未给予ox-LDL刺激的SPC有基础水平的CXCR4表达,50μg/mL的ox-LDL刺激SPC 0-72h,随刺激时间的延长,CXCR4表达逐渐增强,36h达峰值,其mRNA和蛋白水平分别为基础水平的5.73倍和5.02倍,差异均有统计学意义(p<0.05),随后逐渐下降,但仍高于基础水平。免疫荧光染色和共聚焦激光检测并观察到在0h时即未给予ox-LDL刺激时SPC的胞质和细胞膜表面有少量的CXCR4表达,随着作用时间的延长,CXCR4的表达量逐渐上调且在36h时其在SPC的胞质和细胞膜表面的表达最强,60h后CXCR4的表达量逐渐下降。结论ox-LDL上调小鼠骨髓源性SPC CXCR4的表达,提示ox-LDL有可能通过上调SPC CXCR4的表达致SPC迁移和归巢至病变动脉参与As形成。