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目的研究双硫仑(Disulfiram,DSF)/Cu作用人弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞株及原代细胞前后BCL6及BCL6相关通路蛋白变化,探讨DSF/Cu通过下调BCL6信号通路抑制DLBCL的分子机制。同时分析DLBCL患者循环滤泡辅助性T细胞(Tfh)及其亚型,及DSF/Cu作用前后Tfh变化,旨在为DLBCL的临床治疗提供实验依据。方法1.利用多种癌症基因组图谱数据库(The Cancer Genome Atlas,TCGA)在线工具分析GEPIA2.0分析BCL6基因在DLBCL患者中的表达情况、与患者生存的关系,利用DAVID在线网站进行GO和KEGG分析,利用TIMER2.0在线数据库分析BCL6与免疫浸润细胞的相关性。2.Annexin-V PI双染法检测DSF/Cu对DLBCL原代细胞凋亡的影响。3.JC-1法检测DSF/Cu对DLBCL原代细胞线粒体膜电位的影响。4.Western blot实验检测DSF/Cu作用后DLBCL细胞株和原代细胞BCL6相关蛋白水平。5.流式细胞术检测DLBCL患者循环Tfh及其亚型。6.流式细胞术检测DSF/Cu对DLBCL患者Tfh的影响。结果1.BCL6基因在DLBCL女性患者比男性患者表达更高;在白种人患者比亚洲人种表达高。2.BCL6基因的高表达DLBCL患者比低表达患者预后更好。3.GO/KEGG基因富集分析显示BCL6相关基因可以富集在MAPK通路。4.免疫浸润结果显示BCL6与多种免疫细胞相关。5.DSF/Cu作用后诱导DLBCL原代细胞凋亡。6.DSF/Cu作用后诱导DLBCL原代细胞线粒体膜电位下调。7.DSF/Cu作用DLBCL细胞后,细胞株的BCL6下调,OCI-LY7和OCI-LY10的p53上调,U2932的p53下调,原代细胞的BCL6下调,BCL2上调,BCL-XL下调,BAX不变,p53上调或下调。8.DSF/Cu下调DLBCL细胞株和原代细胞BCL6相关调节蛋白AIP、LITAF。9.DSF/Cu 作用 DLBCL 细胞后,JNK 和 ERK 下调,OCI-LY7 和 U2932 的 p38 下调,OCI-LY10的p38不变,原代细胞JNK和ERK下调,p38下调不变。10.DLBCL患者循环CD4+CXCR5+Tfh增多,Tfh1亚型减少,Tfh2和Tfh17亚型增多,CD4+CXCR5-Tph减少,Tph1亚型减少,Tph17亚型增多;DLBCL患者循环CD4+PD-1+T细胞增多,Tfh及其不同亚型和Tph及其不同亚型均高表达PD-1。11.DSF/Cu 作用后,DLBCL 患者 CD4+CXCR5+Tfh、CD4+PD-1+T 细胞、CD4+CXCR5+PD-1+T 细胞,CD4+CXCR5-PD-1+T 细胞及 CD4+CXCR5+BCL6+T 细胞显著下调,CD4+CXCR5-Tph上调。结论1.DSF/Cu诱导DLBCL原代细胞凋亡,线粒体膜电位下降。2.下调BCL6相关ROS-MAPK信号通路可能是DSF/Cu抗肿瘤机制之一。3.DLBCL患者循环CD4+CXCR5+Tfh增多,Tfh2和Tfh17亚型增多,而循环CD4+CXCR5-Tph减少,其中Tph17亚型增多,Tfh及其不同亚型和Tph及其不同亚型均高表达PD-1。4.DSF/Cu可能通过抑制转录因子BCL6的表达抑制Tfh细胞分化进而干预B细胞生长过程。