喉癌在我国北方属于高发肿瘤，其浸润，复发，转移，严重危害人们的生命。长期以来肿瘤的临床治疗一直存在三大难题:①常规的放化疗方案选择性较差;②肿瘤细胞产生耐药性;③肿瘤发生微小转移。肿瘤的免疫治疗无疑为解决这些问题提供了一条途径,其中,能靶向肿瘤细胞的双功能抗体疗法因具有较好的临床应用前景,现已成为这一新途径中的研究热点。双特异性抗体(BispecificAntibody,BsAb)是指一类具有双特异性的抗体杂合子，它们在功能上是单价的，化学结构上是双价的。BsAb优于传统的单克隆抗体，我们应用杂交-杂交瘤技术制备的双特异性抗体，是把两种分泌抗人喉癌和抗VEGF两种抗体的杂交瘤细胞进行再次融合，产生的的杂交-杂交瘤细胞不仅能够分泌两个亲代细胞的Ig，也分泌同时表现两个亲代细胞Ig结合特异性杂交分子，这种特殊的分子即为我们制备的抗人喉癌/抗VEGF双特异性单克隆抗体。双特异性单克隆抗体作为一种新型肿瘤免疫治疗手段已被人们接受，它能特异性识别肿瘤细胞并与之结合，使肿瘤细胞失去分泌细胞因子的功能。恶性肿瘤的无限制及侵袭性生长依赖于持续的血管生成。多种肿瘤都高表达VEGF,正常组织极少表达,而且肿瘤组织VEGF的表达水平与肿瘤复发、转移及预后密切相关。国内外的研究表明在喉鳞状细胞癌中,VEGF表达升高,通过促进新的血管形成,促进肿瘤的生长,其表达高低与肿瘤的分期和分化明显相关。根据肿瘤的生长和转移依赖于血管生成的机制,针对肿瘤血管生成过程中的任一环节均可有效地抑制肿瘤血管生成,从而抑制肿瘤生长。血管生成有赖于生长因子的刺激,因此,拮抗血管生成刺激因子是抗肿瘤血管生成战略中的关键环节。一种<WP=28>肿瘤可分泌多种血管生成因子,一种血管生成因子也可为多种肿瘤所分泌,就寻找一种对多数肿瘤来说共有识别的特异性血管生成因子而言,VEGF极具价值。因此, 内皮细胞生长因子(VEGF)是肿瘤血管生成的主要促进因子,能诱导肿瘤血管生成。采用VEGF抗体封闭VEGF在肿瘤治疗中有重要意义。抑制VEGF的生理功能,将为抗肿瘤治疗提供一种新手段、新方法。我们制备的BsAb不但能和肿瘤血管内皮细胞结合杀伤抑制血管生成，抑制细胞因子释放，而且特异性和喉癌细胞结合，同时激活肿瘤周围的效应细胞，对靶细胞进行杀伤，疗效更准确高效，优于传统的单克隆抗体。本实验分别用人喉癌和VEGF两种抗原免疫Balb/c小鼠,采用单克隆抗体技术技术制备两种抗原的单克隆抗体（McAb），再通过杂交-杂交瘤技术制备抗人喉癌/抗VEGFBsAb四倍体二次杂交瘤细胞株；通过间接ELISA，双向免疫扩散等方法对McAb及BsAb的效价，抗体类型，特异性等进行初步鉴定。成功制备出1株抗人喉癌/抗VEGF双特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株，其所分泌的BsAb为IgG1/IgG2a，性质稳定，特异性及效价均通过鉴定；同时获得抗人喉癌和抗VEGF杂交瘤细胞株各5株，分别对其中3株所分泌的McAb鉴定表明抗体均一稳定，效价高，抗体类型分别为3株IgG1,2株IgG2a,1株Ig2b；发现两点可以缩短制备周期的新经验。总之，本实验为进一步研究喉癌免疫治疗新方法奠定了基础，对多种肿瘤的免疫治疗研究也有借鉴作用；同时也十分有利于VEGF研究及喉癌早期诊断研究。