[背景与目的]老年黄斑变性(AMD)是目前老年人主要致盲眼病之一，其主要直接致盲病因是脉络膜新生血管(CNV)。随着中国人口老龄化，AMD的患病率逐年增加。尽管国内外学者进行了大量的研究，但对于CNV的确切发病机制尚不清楚，也尚无理想的治疗方案。本研究拟从整体角度出发，应用国际新兴的蛋白质组学试验研究方法，对CNV动物模型异常蛋白质进行筛选以及鉴定，为后继CNV的新药靶筛选及研究提供分子参考。许多视网膜、脉络膜疾病的发生都与视网膜色素上皮(RPE)细胞的缺氧密切相关，我们应用双向电泳以及质谱分析等蛋白质组学技术，分析、鉴定体外培养人RPE细胞正常及缺氧状态下的差异蛋白质，为揭示缺氧对RPE细胞的影响以及与CNV生成的关系提供试验依据。[材料与方法] 8只BN大鼠充分散瞳、麻醉后随机选取一眼作为试验眼，647nm氪激光光凝试验眼视网膜20点。另一眼为对照眼。光凝后4W行FFA检查，确认CNV生成，处死动物行病理切片观察，提取动物视网膜-脉络膜复合体蛋白，液氮冷冻以备蛋白质组学鉴定；对数生长期正常及缺氧状态人RPE细胞细胞已备蛋白质组学鉴定。各试验组提取蛋白样本后行等电聚焦电泳(IEF)，随后行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，进行第二次分离。采用考马斯亮蓝染色法对凝胶进行显色固定，扫描仪获取图像，Image Master 2D Elite软件行分析配比，筛选出正常组／CNV组视网膜-脉络膜复合体以及正常组／缺氧RPE细胞表达明显差异的蛋白质斑点，随机选取差异斑点进行质谱分析(MS)，数据经蛋白质组数据库检索得出差异表达蛋白。[结果] BN大鼠氪激光光凝眼视均有CNV的生成；正常对照组视网膜-脉络膜2-DE平均分离蛋白斑点405个，组内蛋白斑点匹配率90.26％，CNV组436个，匹配率91.63％。CNV组与正常对照组组间匹配率为89.22％，发现Volume值改变≥2.0倍的点共44个差异点白质斑点，其中21个表达量上调，23个下调。随机选取9个蛋白斑点应用MALDI-TOF-MS分析鉴定蛋白(成功鉴定7个，2个为蛋白混合物或未知蛋白)：表达上调的为真核起始因子5A，线粒体ATP酶D链、Cu，Zn-超氧化物歧化酶、内质网蛋白ER29以及转甲状腺蛋白D链；表达下调的为μ-晶体蛋白和NAD异柠檬酸脱氢酶α。RPE细胞缺氧组／对照组2-DE及MS结果：正常组分离蛋白斑点578个，组内匹配率92.90％；缺氧组559个，匹配率91.41％；两组间蛋白斑点匹配率为85.47％。发现Volume值改变≥2.0倍的点共92个，其中32个点表达上调，60个点表达下调。随机选择7个蛋白斑点行MS分析，成功鉴定5种差异表达蛋白质(3个斑点为相同的蛋白)：表达上调为热休克蛋白70、热休克蛋白60；表达下调的为β-肌动蛋白、β微管蛋白以及过氧化还原蛋白3。[结论]经检索，本研究为首次应用蛋白质组学方法对大鼠CNV模型进行差异蛋白表达的研究；大鼠CNV的发生过程中多种蛋白质表达改变；表达差异的蛋白可导致蛋白质合成旺盛，线粒体功能增加，抗氧化能力增加而细胞的有氧代谢水平下降；缺氧状态下RPE细胞表达差异蛋白可引起细胞应激能力明显增强，而主要细胞骨架蛋白下调，细胞维持形态、保持内部结构有序性的能力下降；本研究首次发现人RPE细胞在缺氧状态下HSP60表达上调，此蛋白的进一步研究可能能够发现新的CNV致病途径；蛋白质组学方法为CNV相关疾病的研究提供了一个很好的参考平台。