【摘 要】
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实验研究和流行病学证明从茶叶中提取的茶多酚在实验上具有抗癌效应,但它在干预癌细胞机制尤其是信号转导通路的作用有待阐明.曾有报道茶多酚能诱导人鼻咽癌细胞系CNE1-LMP1
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实验研究和流行病学证明从茶叶中提取的茶多酚在实验上具有抗癌效应,但它在干预癌细胞机制尤其是信号转导通路的作用有待阐明.曾有报道茶多酚能诱导人鼻咽癌细胞系CNE1-LMP1细胞凋亡,可能通过Caspase-3的活化诱导凋亡.不过要从信号传导角度来阐明茶多酚干预EB病毒LMP1表达的关键,是否通过抑制Survi vin,从而解除对Caspase-3的抑制,进而抑制肿瘤细胞增殖和促进肿瘤细胞凋亡尚无定论.该实验将进一步比较EB病毒标准株和广州变异株瘤基因LMP1之间的序列差别的同时,着重观察茶多酚体外抗EB病毒LMP1的效应.通过研究茶多酚在促进EB病毒LMP1表达阳性的肿瘤细胞凋亡过程中,对Survivin和Caspase-3在细胞周期中信息通道的调控,从而探讨茶多酚诱导EB病毒LMP1表达阳性肿瘤细胞凋亡的分子机制.[结论]1.该实验首次成功构建了来源于NPC高发区广州鼻咽癌病人外周血的EB病毒变异株的LMP1Var和来源于EB病毒标准株B95-8的LMP1的重组质粒.经测序和NCBI的BLAST系统分析比较,与EB病毒标准株B95-8的LMP1序列比较:EB病毒广州变异株的LMP1Var具有下列基因结构变异:第一外显子XhoI酶切位点的丢失和第三外显子30bp的缺失.2.成功构建了LMP1Var和B95-8的LMP1的重组绿色荧光融合蛋白真核表达质粒.分别将两种不同来源的LMP1质粒转染入人EBV阴性的高分化鼻咽癌细胞株CNE1后,倒置荧光显微镜下观察,分别显现原型LMP1和LMP1var的融合蛋白的表达.免疫细胞化学法检测到相同的结果.其中LMP1Var序列变异的确定和重组质粒的构建,为研究EBV亚株与NPC高发关系以及化学干预和抗癌药的筛选,提供了重要的技术基础.3.茶多酚能有效抑制表达EB病毒LMP1的人低分化鼻咽癌细胞株SUNE1和Burkitts淋巴瘤Raji细胞株的增殖作用,呈时间和浓度依赖性.同时首次报道了茶多酚对恶性淋巴瘤Raji细胞株增殖的抑制作用.4.茶多酚诱导SUNE1和Raji细胞凋亡时,使细胞周期阻滞于G0/G1期.5.茶多酚干预LMP1激活信号转导通路中的靶分子,尤其是抑制Survivin的表达,使Caspase-3的表达的上调,这在茶多酚诱导SUNE1和Raji细胞凋亡中起着十分重要的作用.
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