【摘 要】
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目的基于肝脏免疫调节探讨由京尼平苷(Geniposide)及绿原酸(Chlorogenic acid)配伍组成的中药有效成分复方GC方治疗实验性NASH的作用机制。方法通过高反式脂肪高胆固醇高胆盐饲料复合高糖饮水20周诱导小鼠实验性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型,实验小鼠随机分为正常组(Control),高脂高糖模型组(HFHC)和GC方用药组(GC),每组8只。第20周开始给药,给药5周后取
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目的基于肝脏免疫调节探讨由京尼平苷(Geniposide)及绿原酸(Chlorogenic acid)配伍组成的中药有效成分复方GC方治疗实验性NASH的作用机制。方法通过高反式脂肪高胆固醇高胆盐饲料复合高糖饮水20周诱导小鼠实验性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型,实验小鼠随机分为正常组(Control),高脂高糖模型组(HFHC)和GC方用药组(GC),每组8只。第20周开始给药,给药5周后取材,观察:(1)药效学指标,包括:(1)肝组织甘油三酯(TG)含量;(2)血清谷丙转氨酶(ALT)、血清谷草转氨酶(AST)活性;(3)血清总胆固醇(Tch)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;(4)空腹血糖(GLU)、空腹胰岛素(INS)水平及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);(5)肝组织病理(HE、天狼猩红);(6)肝组织Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;(2)肝脏免疫相关指标,包括:(1)流式细胞仪分析肝脏免疫细胞CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、树突状(DC)细胞比例;(2)肝组织巨噬细胞标志F4/80和中性粒细胞标志MPO免疫组织化学染色;(3)肝组织Th1、Th2、Th17和Treg细胞核转录因子m RNA水平检测;(4)肝组织白介素类促炎与抑炎因子、趋化因子以及集落刺激因子蛋白含量。结果(1)药效学结果:(1)GC方显著降低NASH小鼠肝组织TG含量(P<0.05);(2)GC方显著降低血清ALT和AST活性(P<0.01);(3)GC方显著降低血清Tch和血清LDL-C水平(P<0.01);(4)GC方显著降低血清空腹INS水平(P<0.05);(5)组织学上GC方显著改善NASH小鼠肝组织脂肪变性、炎症以及气球样变性,减少肝脏天狼猩红阳性染色面积;(6)GC方减少COL-Ⅰ和α-SMA在肝组织的表达;(2)肝脏免疫相关结果:(1)GC方显著下调肝组织NKT细胞、CD3+T细胞和CD4+T细胞的比例(P<0.05);(2)GC方降低肝组织巨噬细胞表面标志F4/80和中性粒细胞标志MPO的蛋白表达;(3)GC方显著下调Th1核转录因子T-bet的m RNA水平(P<0.05);(4)肝脏炎症因子结果:在白介素类炎症因子方面,GC方显著降低促炎的IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-12的蛋白水平(P<0.01),降低抑炎的IL-10蛋白水平(P<0.05);在肿瘤坏死因子和干扰素类炎症因子方面,GC方显著降低TNFα和干扰素γ(IFNγ)的蛋白水平(P<0.05);在趋化因子方面,GC方显著降低单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、C-X-C基序趋化因子1(CXCL-1)、C-C基序趋化因子11(CCL-11)的蛋白水平(P<0.05或P<0.01);在集落刺激因子方面,GC方显著降低粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的蛋白水平(P<0.05)。结论(1)中药成分复方GC方显著改善NASH小鼠肝脏脂质沉积、炎症及纤维化;(2)GC方显著降低肝脏NKT细胞、CD3+T细胞、CD4+T细胞比例,抑制巨噬细胞和中性粒细胞表达,调节NASH小鼠肝脏免疫。
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