子宫内膜癌(endometrial carcinoma)是激素依赖性肿瘤，占女性生殖道肿瘤的20％—30％，严重危害着妇女的健康。孕激素受体(Progesterone Receptor，PR)对于正常子宫内膜的功能起到重要调节作用，但在子宫内膜癌中，PR常表达下调，其表达与临床生物学行为相关，PR表达下调或者缺失的患者，预后差，易于转移复发，激素治疗不敏感，但是对于PR下调的机制，仍然研究不明。有研究表明基因异常甲基化可以导致其表达下调或者沉默，因此本课题从表观遗传学方面着手，研究子宫内膜癌中PR基因异常甲基化与肿瘤临床生物学行为的相关性。第一部分：不同分化子宫内膜癌中孕激素受体甲基化的研究目的：检测在不同分化子宫内膜癌细胞系以及组织标本中，是否存在PR异常甲基化，PR异常甲基化在不同分化子宫内膜癌中是否存在差异，了解DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMT)与子宫内膜癌临床生物学行为的相关性。方法：在子宫内膜癌组织标本中，采用Realtime PCR法检测组织标本中PR，DNMT1，3A，3B表达情况，采用MSP法检测不同分化组织标本中PR异常甲基化状况；在不同分化子宫内膜癌细胞系中，利用MSP，BSP的方法检测不同分化子宫内膜癌细胞系以及组织标本中PR基因甲基化的状况，为了进一步证实PR基因甲基化与表达相关性，DNA甲基转移酶抑制剂(5-aza-2’-deoxycytidine，ADC)以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂(trichostatin A，TSA)处理子宫内膜癌细胞系前后，分别采用Realtime PCR以及Western Blot的方法检测药物处理前后PR表达变化，采用MTT方法以及流式细胞方法检测ADC，TSA以及孕激素P抑制细胞生长，诱导细胞凋亡的作用。结果：我们发现在子宫内膜癌组织标本以及细胞系中存在PR基因启动子区域和外显子区域异常甲基化，而且外显子区域甲基化密度与不同分化子宫内膜癌中PR表达相关，DNMT随着子宫内膜癌组织分化渐差，表达增高。为了进一步验证异常甲基化与PR的下调的关系，在使用DNMT抑制剂ADC以及组蛋白去乙酰化酶TSA去除PR的甲基化后，我们发现：PR表达上调，同时异常甲基化位点减少；细胞的生长受到了抑制，流式细胞的结果明确显示：DNA甲基转移酶抑制剂ADC以及组蛋白去乙酰化酶TSA可以诱导细胞凋亡，同时加入孕激素，有协同诱导细胞凋亡的作用。讨论：我们通过试验证实：子宫内膜癌组织标本以及细胞系中，存在PR基因异常甲基化，与PR表达下调关系密切。外显子区域甲基化密度和不同分化子宫内膜癌中PR表达相关，DNMT可能参与了子宫内膜癌进展。第二部分：子宫内膜癌中孕激素受体基因异常甲基化与组蛋白乙酰化修饰目的：DNA异常甲基化伴随的是组蛋白乙酰化状态的改变，我们以第一部分结果为基础，进一步对DNA甲基化后，组蛋白乙酰化状态进行研究，以阐明PR基因异常甲基化导致其表达沉默的机制，并对组织标本中组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，HDAC)进行检测，以阐明HDAC1，6与子宫内膜癌临床生物学行为之间的相关性。方法：采用ChIP方法，对于子宫内膜癌细胞系中PR基因启动子以及外显子区域去甲基化前后，组蛋白乙酰化状态进行研究，由于组蛋白乙酰化受到HDAC的催化，我们利用Realtime PCR的方法对HDAC1，6在子宫内膜癌组织中的表达进行研究，以观察HDAC的表达与肿瘤临床生物学行为的相关性。结果：发现在子宫内膜癌细胞系中，伴随PR异常甲基化，是PR启动子以及外显子区域组蛋白去乙酰化，在PR去甲基化后，乙酰化组蛋白H3和H4结合增多。对于HDAC1以及HDAC6的表达研究显示，在内膜样腺癌HDAC1，6的表达高于浆液性和透明细胞型子宫内膜癌，同时Ⅰ级分化子宫内膜癌组织中的表达明显高于Ⅱ和Ⅲ分化内膜癌组织，肌层浸润浅，则表达高。讨论：PR甲基化后，组蛋白乙酰化修饰的改变参与了PR表达沉默，组织标本中HDAC1，6的表达增高则和患者预后较好相关。其与PR表达水平较一致推测HDAC有可能作为PR转录激活因子，参与PR调节。