苏云金芽胞杆菌的两类S-层蛋白共存于S-层和伴胞内涵体

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zwj_10061
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我们筛选了伴胞晶体组成为S-层蛋白的菌株,从约20株菌株中得到了除CTC菌株之外的4株苏云金芽胞杆菌菌株B22,I13,H67和BMB1152,并且将这类菌株称为PICS菌株(strains whose parasporal inclusions consist of S-layer protein)。我们从这4株PICS菌株中克隆到8个典型的S.层蛋白基因,这些菌株的每个基因组都包含两个毗邻的S-层蛋白基因。遗传进化树分析表明这些S-层蛋白在进化树上位于两个大的分支,我们分别称为SLP1s和SLP2s。我们对菌株CTC和BMB1152的两类S-层蛋白进行了研究,Western blot以及免疫荧光显微镜实验证明SLP1s和SLP2s都是S-层的组成成分,只是呈现两种表型,即CTC菌株的两个S-层蛋白在对数生长期和稳定期都表达形成一致的S-层;而BMB1152则在对数期主要由SLP1形成S-层,进入稳定期时则刚好相反,主要由SLP2形成S-层。对菌株CTC和BMB1152伴胞内涵体的免疫荧光显微镜检测证明在CTC和BMB1152菌株中,SLP1s和SLP2s都是伴胞内涵体的组成成分,这说明两类S-层蛋白都存在于伴胞内涵体。另外,我们将来自CTC和BMB1152的4个S-层蛋白基因在无晶体突变菌株BMB171进行异源表达,结果表明它们都能形成伴胞内涵体。以上这些结果表明,PICS菌株在苏云金芽胞杆菌具有一定的普遍性,它们的S-层蛋白基因在遗传进化树上分为两类,两类S-层蛋白共存于S-层和伴胞内涵体,两类S-层蛋白基因异源表达亦能形成伴胞内涵体。   苏云金芽胞杆菌幕虫亚种YBT-020被发现含有两种类型的伴胞晶体,一种与芽胞粘连,已知是由位于质粒上的cry26和cry28基因编码;另一种则是游离在芽胞外面,其组成成分尚不清楚。BMB1152是苏云金芽胞杆菌幕虫亚种YBT-020消除质粒的衍生菌株,该菌株不含有Cry蛋白组成的伴胞晶体,已知它的游离晶体成分是S-层蛋白,由此我们推测野生菌株YBT-020的游离晶体很可能是S-层蛋白,则在YBT-020中就会存在两种截然不同的类型的伴胞内涵体,那么他们的共存是否会对S-层蛋白的表达产生影响?为了研究YBT-020中游离晶体的组成以及两种伴胞晶体共存于苏云金芽胞杆菌对于S-层蛋白的表达和调控的影响,我们同时研究和比较了YBT-020和其缺失Cry晶体而仅包含S-层蛋白晶体的衍生菌株BMB1152的S-层蛋白表达情况。Western blot结果表明在YBT-020中存在两个S-层蛋白,但是由S-层蛋白组成的游离伴胞内涵体较其衍生菌株BMB1152不稳定。对三株菌株YBT-020和BMB1152(YBT-020无质粒突变株)以及BMB1151(YBT-020仅缺失cry26所在质粒pBMB26)芽胞期的S-层蛋白进行了SDS-PAGE检测,结果表明在YBT-020中100 kDa的S-层蛋白的表达量相当低,而在突变株BMB1151和BMB1152中则大量表达,表明该蛋白的表达与cry26基因所在的质粒(pBMB26)相关,该质粒上可能存在着某些负调控因子影响着着S-层蛋白的表达。综合以上的研究结果表明,在YBT-020中,由cry基因和slp基因编码的两种类型的伴胞晶体同时存在,前者形成粘连型,后者形成游离型。在芽胞期两个S-层蛋白均表达但是都不稳定易降解,此时S-层蛋白的表达受到YBT-020中的质粒pBMB26的负调控。
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