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研究背景肝细胞性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一类全球范围高发病率和高死亡率的恶性肿瘤。肝星状细胞(Hepatic stellate cells,HSCs)已被证实可以通过促进肿瘤免疫抑制来促进HCC的进展,然而其具体机制尚不完全清楚。半乳凝集素-1(galectin-1)是半乳凝集素家族的重要成员之一,已被发现可以通过促进免疫抑制来促进肿瘤进展,在HCC中亦有着显著的促癌活性,然而其相关机制仍有待深入探讨。mi RNA-22是mi RNA中的一种,其在HCC中的显著抑癌作用已经得到证实,然而相关机制仍不明确。鉴于HSC和galectin-1在HCC中相似的促肿瘤进展机制以及前期研究中发现的galectin-1和mi RNA-22间可能存在的靶向调控关系,我们推测mi RNA-22可能通过调控HSC中galectin-1表达发挥其在HCC中的抑癌作用。因此,我们通过研究HSC和galectin-1在促免疫抑制以及促HCC肿瘤进展作用中的相关性,并寻找其与mi RNA-22靶向调控的相关证据,为探索以mi RNA-22-HSC-galectin-1为靶点的HCC治疗提供新的理论基础和实验依据。研究方法和结果1、半乳凝集素-1在人肝星状细胞中的表达及作用研究从西南医院肝胆外科收集肝脏局部良性疾病手术患者正常肝脏组织,提取人原代肝星状细胞并鉴定。采用与CD3+T淋巴细胞共培养的方式观察到HSC拥有促T细胞凋亡以及促Th1/Th2免疫平衡偏移的能力。采用RT-PCR、Western blot、免疫组化以及ELISA等方式证实人HSC中有galectin-1的表达和分泌。构建galectin-1抑制和过表达载体,干预HSC中galectin-1表达后发现其促T细胞凋亡以及促Th1/Th2免疫平衡偏移的能力与其galectin-1表达情况呈正向相关。以上结果证实(1)活化人肝星状细胞中确有galectin-1的表达和分泌;(2)活化人肝星状细胞可以促CD3+T淋巴细胞凋亡及Th1/Th2免疫平衡偏移,且此能力与其galectin-1表达密切相关。2、半乳凝集素-1在肝星状细胞中的表达与肝细胞性肝癌肿瘤进程的相关性研究从西南医院肝胆外科收集肝细胞性肝癌手术患者肿瘤肝组织,提取人原代肝星状细胞。比较不同来源HSC(HCC源:Ca-HSCs,正常肝组织源:N-HSCs)中galectin-1表达及免疫调节能力差异,发现Ca-HSCs拥有明显更高的galectin-1表达以及更强的促T细胞凋亡和促Th1/Th2免疫平衡偏移能力。收集临床HCC患者肿瘤组织样本和病例资料,通过免疫荧光染色证实了活化HSC标志物α-SMA和galectin-1在肝组织中的共表达情况,通过连续石蜡切片免疫组化染色发现了活化HSC标志物α-SMA和galectin-1在HCC组织间质中的高度共表达情况。通过统计学分析发现了galectin-1表达以及CD3表达与HCC患者临床病理特征参数的显著相关性,进一步通过生存分析发现galectin-1高表达以及CD3低表达都是预示HCC患者不良预后的独立危险因素,且这两者间呈明显负性相关。以上结果表明,肝星状细胞可以通过galectin-1促进肝细胞性肝癌中免疫抑制环境的形成并促进肿瘤进展。3、mi RNA-22与肝星状细胞中半乳凝集素-1表达及促免疫抑制功能的相关性研究通过RT-PCR检测不同组织源肝星状细胞中mi RNA-22的表达情况后发现,在HSC中mi RNA-22的表达与galectin-1表达呈显著负相关,且癌组织源HSC中mi RNA-22表达明显低于正常肝组织源HSC。通过双荧光素酶实验证实了mi RNA-22与galectin-1的靶向调控关系。通过mi RNA-22 mimic转染HSC发现,HSC中mi RNA-22的表达升高可以显著下调其galectin-1表达,并抑制HSC促免疫抑制功能的发挥。以上结果表明,mi RNA-22可以抑制肝星状细胞中galectin-1的表达以及其参与诱导的促T细胞凋亡作用和促Th1/Th2免疫平衡偏移作用,而这种负性调控可能还影响了肝星状细胞在肝细胞性肝癌中的促免疫抑制及促肿瘤进展作用。结论肝星状细胞可以通过galectin-1促进肝细胞性肝癌中免疫抑制环境的形成进而促进肿瘤进展,而这一作用机制受到mi RNA-22的抑制和调控。