【摘 要】
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蛋白质芯片,是继基因芯片之后又一类型的生物芯片,对生物医学研究乃至人类健康具有重大应用价值。目前,蛋白质芯片的发展还处于初级阶段,芯片表面装配的生物分子不稳定、生物活性
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蛋白质芯片,是继基因芯片之后又一类型的生物芯片,对生物医学研究乃至人类健康具有重大应用价值。目前,蛋白质芯片的发展还处于初级阶段,芯片表面装配的生物分子不稳定、生物活性低,非特异性吸附等问题制约着蛋白质芯片的发展和应用。表面改性是解决上述问题的重要途径。
生物膜是生命活动中许多重要反应发生的场所。膜上的蛋白质分子能准确识别相应的生物分子,脂分子双层结构则可有效抑制生物分子的非特异性结合。本文采用仿生学原理,模拟生物膜的基本结构和特性,在固体基片表面制备磷脂分子膜层。研究形成磷脂分子膜层的机理、条件及脂膜的性质,以发展更有实效的蛋白质芯片表面改性的方法。
首先,在硅片甲基改性表面,通过疏水相互作用制备单层磷脂膜,并考察影响脂膜均匀性及稳定性的因素。结果表明分散在水中的脂质体越小,最终形成的平面膜层越均匀,而随着流速的增大,硅片疏水表面上固定的磷脂分子膜层会完全被冲洗掉。
其次,在硅片醛基改性表面制备双层磷脂膜。使用去垢剂分子提高磷脂分子的水溶性,在硅片表面共价固定磷脂分子,并去除去垢剂分子后,通过疏水相互作用吸附聚乙二醇修饰的磷脂分子形成双层磷脂膜,利用聚乙二醇末端修饰的活性基团连接配基分子,以实现蛋白质芯片的活性功能。研究去垢剂分子与磷脂分子的配比对磷脂分子自组装成膜过程及脂膜结构的影响。考察脂膜的特性及应用于无标记椭偏光学蛋白质芯片表面改性的效果。结果表明:五次干燥—水化循环处理后,至少80%的双层磷脂膜仍能稳定固定在硅片表面。制备的磷脂膜层可稳定装配生物分子并保持其生物活性,此外还可有效抑制生物分子的非特异性吸附。调节末端化学基团不同的磷脂分子的比例制备的混合磷脂膜,在组装生物分子上更有优势,并可对组装的配基分子面密度进行控制。
最后,以同样方法在金膜羧基改性表面制备双层磷脂膜,对脂膜形成的过程进行实时分析,并研究磷脂分子膜层的性质及对金表面改性的效果。
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