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目的:筛选结直肠癌西妥昔单抗耐药相关的lncRNA,研究其耐药发生的作用机制,从而为预测结直肠癌西妥昔单抗耐药和克服耐药提供理论基础。方法:(1)利用lncRNA芯片分别就是否对西妥昔单抗耐药的结直肠癌组织及细胞株进行lncRNA表达谱的差异分析,结合生物信息学分析及分子生物学实验,筛选可能在结直肠癌西妥昔单抗耐药中起作用的lncRNA。(2)检测西妥昔单抗敏感组和西妥昔单抗耐药组lncRNA-AC006159.3相对表达水平的差异,了解lncRNA-AC006159.3表达与西妥昔单抗耐药的关系。(3)利用细胞增殖实验检测野生型细胞、西妥昔单抗耐药细胞及lncRNA-AC006159.3过表达的西妥昔单抗耐药细胞的细胞增殖率差异:验证lncRNA-AC006159.3表达与西妥昔单抗治疗耐药的关系。(4)通过不同细胞株(K-ras 野生型细胞、西妥昔单抗耐药细胞及lncRNA-AC006159.3过表达的西妥昔单抗耐药细胞)裸鼠皮下成瘤模型及肝转移模型来进一步研究lncRNA-AC006159.3与西妥昔单抗耐药的关系。(5)检测肠癌组织标本lncRNA-AC006159.3及c-Met表达水平,了解肠癌组织表达lncRNA-AC006159.3与c-Met表达水平之间的关系。在细胞层面通过调控lncRNA-AC006159.3表达,观察c-Met RNA表达水平的相应变化。(6)通过分别干扰lncRNA-AC006159.3和c-Met基因表达观察细胞在西妥昔单抗中增殖率的变化验证lncRNA-AC006159.3和c-Met的靶向关系。结果:(1)通过芯片技术检测共筛选获得17个在各个组间均显著差异的lncRNA。经生物信息学确定lncRNA-AC006159.3可能在肠癌西妥昔单抗耐药中起到重要作用。(2)西妥昔单抗敏感组的lncRNA-AC006159.3相对表达值明显高于西妥昔单抗耐药组。在lncRNA-AC006159.3高表达组肠癌患者接受西妥昔单抗治疗后疗效获益更显著。(3)野生型细胞、西妥昔单抗耐药细胞及lncRNA-AC006159.3过表达的西妥昔单抗耐药细胞的细胞增殖率存在差异,过表达lncRNA-AC006159.3均可部分逆转西妥昔单抗的耐药。(4)在裸鼠皮下成瘤模型中,发现野生型组瘤体体积最小,耐药组瘤体体积最大,lncRNA-AC006159.3过表达的西妥昔单抗耐药细胞组居中,差异达到统计学意义。在裸鼠肝转移瘤模型中我们发现lncRNA-AC006159.3过表达组肝转移瘤结节数目明显低于对照组。(5)在肠癌组织标本中lncRNA-AC006159.3与c-Met的表达水平存在一定的负相关。细胞层面沉默原先高表达的lncRNA-AC006159.3后,c-Met RNA水平相应出现表达上调。过表达lncRNA-AC006159.3后,c-Met蛋白水平显著下降,而干扰lncRNA-AC006159.3表达后,c-Met蛋白水平显著升高。(6)在细胞增殖实验中,干扰lncRNA-AC006159.3表达会逆转西妥昔单抗对细胞增殖的抑制,沉默c-Met基因表达增强西妥昔单抗对细胞增殖的抑制作用。在预先利用siRNA技术将c-Met基因敲低的前提下,再干扰lncRNA-AC006159.3表达就不能逆转西妥昔单抗对细胞增殖的抑制作用了。结论:lncRNA-AC006159.3是结肠癌西妥昔单抗耐药的负调控因子。通过分子细胞生物学实验初步证实了 lncRNA-AC006159.3通过调控c-Met基因表达在肠癌细胞西妥昔单抗耐药中发挥作用。