第一部分油酸诱导SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞 目的:观察油酸对SW872前脂肪细胞的诱导分化作用 方法: 1.光学显微镜观察SW872前脂肪细胞形态的变化。 2.油红0染色观察胞浆中脂滴的聚集。 3.化学比色法测定细胞中甘油三酯的总量。 结果: 1.0.6mMoleicacid诱导分化刺激24h时，SW872前脂肪细胞胞体由大变小，形态由梭形变为园形；诱导分化刺激48h时，细胞体积变大，几乎所有细胞形态变园；诱导分化72h时，细胞呈戒环状。 2.0.6mMoleicacid诱导分化刺激24h时，胞浆中出现细小的脂滴；诱导分化刺激48h时，胞浆中脂滴明显增多；诱导分化72h时，胞浆脂滴含量更多，油红0染色胞浆中可见丰富的脂肪染色。 3.0.6mMoleicacid诱导分化刺激24h时，细胞中甘油三酯总量增多；诱导分化刺激48h时，甘油三酯总量是分化前的8.5倍(p＜0.01)；诱导分化刺激72h时，甘油三酯总量是分化前的14倍(p＜0.01)。 结论:0.6mMoleicacid刺激72h，能成功地将SW872前脂肪细胞诱导分化为典型的成熟脂肪细胞。 第二部分重组人白介素6对SW872脂肪细胞葡萄糖转运及葡萄糖转运体4蛋白表达及转位的影响 目的:观察重组人IL-6对SW872脂肪细胞葡萄糖转运和葡萄糖转运体4的蛋白表达及其转位的影响，探讨rhIL-6与脂肪细胞胰岛素抵抗的关系及其机制；同时观察JAK2的抑制剂AG490及PI3K的抑制剂Wortmannin是否影响rhIL-6对SW872脂肪细胞葡萄糖转运的抑制作用，以探讨在SW872脂肪细胞PI3K信号系统与JAK/STAT信号系统是否存在信息交换。 方法: 1.采用2-脱氧-3H-D葡萄糖摄入法，观察基础状态及胰岛素刺激下，不同浓度rhIL-6对SW872脂肪细胞葡萄糖摄取率的影响。 2.激光共聚焦显微镜观察GLUT4的蛋白表达，以观察rhIL-6对SW872脂肪细胞GLUT4蛋白表达的影响。 3.流式细胞术检测细胞膜GLUT4的蛋白含量，观察胰岛素刺激下，rhIL-6对SW872脂肪细胞GLUT4转位的影响。 结果: 1.在基础状态及胰岛素刺激下，1ng/mlrhIL-6作用24h，对SW872脂肪细胞葡萄糖摄取率无影响；5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/mlrhIL-6使基础状态及胰岛素刺激下SW872脂肪细胞葡萄糖摄取率分别下降16.6％vs20.9％、28.5％vs36.0％、39.5％vs50.1％、47.6％vs57.1％。2.Jak2抑制剂AG490预处理，使rhIL-6对SW872脂肪细胞在基础状态及胰岛素刺激下葡萄糖转运的抑制作用分别降低20％及33％。PI3K抑制剂Wortmannin预处理，增加基础状态及胰岛素刺激下rhIL-6对SW872脂肪细胞葡萄糖转运的抑制作用。 3.20ng/mlrhIL-6作用24h，抑制SW872脂肪细胞GLUT4的蛋白表达，与对照组相比P＜0.01。 4.20ng/mlrhIL-6作用24h，SW872脂肪细胞细胞膜GLUT4蛋白含量明显降低，与对照组相比P＜0.01。 结论: 1、rhIL-6抑制基础状态及胰岛素刺激下SW872脂肪细胞葡萄糖转运，对胰岛素刺激条件下的葡萄糖转运的抑制作用更明显，且呈剂量相关效应。 2、在SW872脂肪细胞JAK/STAT信号系统及PI3K信号系统存在交互作用。3、rhIL-6抑制SW872脂肪细胞GLUT4的蛋白表达。 4、rhIL-6抑制SW872脂肪细胞GLUT4的转位。 5、rhIL-6降低SW872脂肪细胞对胰岛素的敏感性，诱导胰岛素抵抗的形成。 第三部分重组人白介素6对SW872脂肪细胞细胞因子基因和蛋白表达的影响 目的:观察rhIL-6对SW872脂肪细胞细胞因子(脂联素、抵抗素、促酰化蛋白及白介素6)基因及蛋白表达的影响，以探讨rhIL-6对脂肪细胞分泌功能的调节作用。 方法; 1.ELISA方法检测细胞培养上清中脂联素及促酰化蛋白的含量。 2.RT-PCR方法检测SW872脂肪细胞脂联素、抵抗素、白介素6的mRNA水平。 结果: 1.对脂联素的影响：1ng/ml及5ng/mlrhIL-6作用24h，对SW872脂肪细胞脂联素基因及蛋白的表达无影响；10ng/ml、20ng/ml及50ng/mlrhIL-6作用24h，抑制SW872脂肪细胞脂联素基因及蛋白的表达。20ng/mlrhIL-6作用4h，对SW872脂肪细胞脂联素基因及蛋白的表达无影响；随着作用时间的延长，rhIL-6抑制SW872脂肪细胞脂联素mRNA及蛋白的表达，且对转录水平的抑制作用更强。 2.对白介素6的影响：1ng/mlrhIL-6作用24h，对SW872脂肪细胞IL-6mRNA的表达无影响，随着rhIL-6浓度的增加，可促进SW872脂肪细胞IL-6mRNA的表达，但以20ng/mlrhIL-6的作用最强；20ng/mlrhIL-6作用4h即可促进SW872脂肪细胞IL-6mRNA的表达，随着作用时间的延长其促进作用更加明显。 3.对抵抗素的影响：不同浓度及不同作用时间，rhIL-6对SW872脂肪细胞抵抗素mRNA的表达无明显影响，与对照组相比P＞0.05。 4.对促酰化蛋白的影响：1ng/mlrhIL-6作用24h对SW872脂肪细胞ASP的分泌没有影响；而5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/mlrhIL-6作用24h对SW872脂肪细胞ASP的分泌具有不同程度的抑制作用，且随rhIL-6浓度的增加对ASP分泌的抑制作用越明显。20ng/mlrhIL-6作用4h即对SW872脂肪细胞ASP的分泌即有抑制作用，且随着作用时间的延长抑制作用更明显，但以rhIL-6作用12h对ASP分泌的抑制作用最明显。 结论: 1.rhIL-6以剂量和时间相关的方式，抑制SW872脂肪细胞脂联素mRNA及蛋白的表达。 2.rhIL-6以剂量和时间相关的方式促进SW872脂肪细胞IL-6mRNA表达。表明在SW872脂肪细胞IL-6以剂量和时间相关的方式诱导自身的表达，脂肪细胞IL-6mRNA表达受自分泌正反馈调节。 3.rhIL-6以剂量和时间相关的方式，抑制SW872脂肪细胞促酰化蛋白的分泌。4.rhIL-6对SW872脂肪细胞抵抗素mRNA的表达无影响。 5.rhIL-6通过影响SW872脂肪细胞细胞因子的表达而调节脂肪细胞的功能。