【摘 要】
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目的:观察细胞外信号调节激酶5(Extracellular signal-regulated kinase,ERK5)信号通路在流体剪切力(Fluid Shear Stress,FSS)介导下,MC3T3-E1成骨细胞中X连锁凋亡抑制蛋白(X
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目的:观察细胞外信号调节激酶5(Extracellular signal-regulated kinase,ERK5)信号通路在流体剪切力(Fluid Shear Stress,FSS)介导下,MC3T3-E1成骨细胞中X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)的表达情况,并探讨ERK5信号通路在其中的作用。方法:选择生长状态良好的MC3T3-E1细胞进行培养,给予FSS(12dyn/cm~2,45min)、EGF(20ng/ml,10min)、XMD8-92(5μM,1h,ERK5特异性抑制剂)、ERK5-siRNA(特异性地抑制ERK5表达)中的一种或多种刺激,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测不同干预措施下ERK5、P-ERK5、XIAP等蛋白表达变化。结果:生理强度(12dyn/cm~2)的流体剪切力作用45min、20ng/ml EGF作用10min均能够显著提高MC3T3-E1成骨细胞内P-ERK5、XIAP表达水平,但5umol/L XMD8-92作用1h能够阻断此效应,P-ERK5、XIAP表达水平下降。MC3T3-E1成骨细胞转染ERK5-siRNA后,ERK5基因被敲除,FSS促进ERK5磷酸化明显被抑制,与单纯加载FSS相比,ERK5、XIAP表达量减少。结论:MC3T3-E1成骨细胞在20ng/ml EGF作用10min、加载12dyn/cm~2 FSS45min后ERK5被激活,P-ERK5、XIAP表达量显著增加,在5umol/L XMD8-92预先处理1h后此效应减弱,P-ERK5、XIAP表达量减少。ERK5被ERK5-siRNA抑制后ERK5、XIAP表达量减少。证实了MC3T3-E1成骨细胞中ERK5信号通路参与了XIAP蛋白的表达调控。
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